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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR法克隆基因
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wangxueqin

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】PCR法克隆基因 已有6人参与

请教一下各位大侠：
我现在要克隆一个基因，在水稻里面是长3000bp左右，没有内含子，可以设计引物先扩增出中间一段，然后根据已经序列，设计单引物，一直朝两头扩增，这样的思路可以么？是否可以扩增出来整个完整的基因。
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1楼 2010-05-13 09:52:34
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过氧化氢

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
3000多bp多长了点
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9楼2010-05-14 22:52:21
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fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般可以先扩增保守序列，然后设计基因特异性引物，做RACE（建议），Tail-PCR,genome walking等等。你说的单引物恐怕是行不通的。。。
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几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2010-05-13 10:04:22
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wangxueqin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by fungixx at 2010-05-13 10:04:22:
一般可以先扩增保守序列，然后设计基因特异性引物，做RACE（建议），Tail-PCR,genome walking等等。你说的单引物恐怕是行不通的。。。

这个基因已经有人太这个种里面克隆过了，用RACE法行不通，说是GC含量太高了，就只扩增出了中间一小个片段，大概800bp左右的，可能结果不好分析，他们就没有把序列上传到NCBI上面，所以我现在也查不到序列。我们之前也考虑用RACE法，但我老板说直接拿DNA来扩了看看结果，再用单引物扩。

你说的tail pcr, genome walking适合GC含量高的序列么？
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3楼2010-05-13 15:39:52
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
你现在到底是知道序列还是不知道啊，说明白点，3000多是怎么知道的
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4楼2010-05-13 23:33:36
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