应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）
91/1返回列表
查看: 4107  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jm0305100303

新虫 (小有名气)

[求助] 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）

分子生物学的新手，正学习设计引物，向各位大侠求助啊……
利用pET-22b的重组质粒去pcr，希望得到带组氨酸标签的目的蛋白基因，因为组氨酸标签用的是CAC，所以设计出来的引物GC%偏高（66.7%），Tm值79.2(上游引物的tm值才56.7，差20多度……)，引物里面就是保护碱基（3bp）+酶切位点（6bp）+终止密码子（3bp）+5个GTG（15bp）的重复，一共27个bp，不知道这样的引物能不能p出目的基因来啊，如果能p出来，退火温度应该用多少呢？

[ Last edited by jm0305100303 on 2011-9-19 at 13:09 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-09-19 12:57:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-09-20 17:52:04
jm0305100303(金币+2): 谢谢啊 2011-09-20 20:53:49
jm0305100303(金币+3): 楼下的不能给 就都给你吧 2011-09-20 20:58:14
wanhscn(金币+1): 对的，可以先试试。有的时候不能全部相信软件！ 2011-09-21 08:34:23
试试吧，不行的话，再将下游引物延长20 bp ,GC含量就降下来了。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-09-20 11:30:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 2011-09-21 07:53:54
现在的酶都很好了，PCR是越来越容易了。我们经常做的PCR，一条引物50bp，一条20bp，Primer Premier评分不超过5分，一样能做出来。你这不是很大的问题，按普通PCR的程序去做就是了，退火温度先用常规的55℃，不行的话再试下50℃。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-09-20 17:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jm0305100303

新虫 (小有名气)
西瓜: 木有问题，肯定成功！ 2011-09-21 17:09:12
我又往后延伸了20多个bp，但是后面还是gc%很高，温度最后讲到71.多，就这样了，好像用质粒pcr比较容易，引物拿去合成了，希望能p出来，也能酶切的出来，额这个新手第一次搞这个实在是不大给力啊……希望能成功
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-09-20 20:50:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jm0305100303

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-09-20 17:55:13:
现在的酶都很好了，PCR是越来越容易了。我们经常做的PCR，一条引物50bp，一条20bp，Primer Premier评分不超过5分，一样能做出来。你这不是很大的问题，按普通PCR的程序去做就是了，退火温度先用常规的55℃，不行的 ...

想给你金币 说是不是回复求助帖 不能给……
赞一下 回复此楼
5楼2011-09-20 20:55:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jm0305100303 at 2011-09-20 20:55:36:
想给你金币 说是不是回复求助帖 不能给……

没有技术含量的回答，就没想要你金币，所以选的就是“不应助”，哈哈~
赞一下 回复此楼
6楼2011-09-20 21:04:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zc10052157

新虫 (正式写手)
★
西瓜(金币+1): 欢迎交流！互相学习！ 2011-09-21 17:09:58
60°一般是黄金温度哦
赞一下(1人) 回复此楼
hold住
7楼2011-09-21 10:10:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

629837231

新虫 (初入文坛)
你设引物的时候去掉终止密码子啊，

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
8楼2017-03-28 01:10:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sherry910

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2017-09-01 09:01:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jm0305100303 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭