应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 载体构建技术请教，如何设计引物提取基因插入载体中？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
41/1返回列表
查看: 1588  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hshzhq

铜虫 (正式写手)

[交流] 载体构建技术请教，如何设计引物提取基因插入载体中？

现在的目的是：
1、从人的细胞中获取MUC1基因的序列，这一步需要说一下引物设计方面信息，有个问题，除了设计出引物P出基因的CDS序列之外，肯定是需要在这个CDS序列前后加入酶切位点的，但是本身基因没有酶切位点，这个怎么才能加上酶切位点？
2、vector的酶切酶连，酶切就是容易，但是选择的酶切类型应该要与之前P出的基因加上去两端的酶切位点一致的，是吧？
3、如果是做shRNA和microRNA研究，序列怎么添加酶切位点？
最好举个例。
回答的箱子有额外加分。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-12-28 15:38:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+3): 鼓励新虫发帖哦，GOOD! 2012-01-09 09:44:13
看来这个问题没人回答，我就答一下吧，楼主应该是不常做分子这一块的实验吧。这个问题的解决思路是：
1、分析你想要做的基因的序列的限制性酶切图谱和你要用到的载体的多克隆位点，选取两个你基因上没有酶切位点但是载体的多克隆位点上有的酶切位点，而且这两个酶最好是常用的，可以双酶切的。
2、设计引物，将酶切位点加在你设计的上下游引物上，此时你要确定载体上多克隆位点的表达是有方向的，哪个酶切位点在前面你就把哪个酶切位点放在上游引物上，后面的放在下游引物上。你也可以在引物的酶切位点上加上保护碱基。
3、用引物pcr扩增目的基因，将其连在克隆载体上，如果引物上有保护碱基的话也可以直接将PCR产物酶切，与酶切之后的载体连接，然后转化大肠杆菌就可以了。
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2012-01-08 21:56:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hshzhq

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-01-08 21:56:49:
看来这个问题没人回答，我就答一下吧，楼主应该是不常做分子这一块的实验吧。这个问题的解决思路是：
1、分析你想要做的基因的序列的限制性酶切图谱和你要用到的载体的多克隆位点，选取两个你基因上没有酶切位点 ...

双酶切是什么意思？需要考虑两个不同切割酶的Buffer性质和其他特性吗？“如果引物上有保护碱基的话也可以直接将PCR产物酶切，与酶切之后的载体连接”里面的意思是不是退火成双链后就可以酶切，是这个意思吗？
赞一下 回复此楼
3楼2012-01-09 23:11:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyacinth326

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2012-01-10 17:34:11
hshzhq(金币+5): 2012-01-18 15:53:59
引用回帖:
2楼: Originally posted by hyacinth326 at 2012-01-08 21:56:49:
看来这个问题没人回答，我就答一下吧，楼主应该是不常做分子这一块的实验吧。这个问题的解决思路是：
1、分析你想要做的基因的序列的限制性酶切图谱和你要用到的载体的多克隆位点，选取两个你基因上没有酶切位点 ...

对啊，需要考虑要用到的两种酶的性质啊，看看是否有通用的buffer，PCR产物最好是凝胶回收或者是PCR产物回收之后，再酶切。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2012-01-10 11:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hshzhq 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +5 美丽的youth_ 2026-04-04 6/300 2026-04-06 06:57 by houyaoxu
[考研] 材料334求调剂 +18 Eecho# 2026-04-03 18/900 2026-04-06 00:56 by fmesaito
[考研] 320分人工智能调剂 +8 振—TZ 2026-04-03 8/400 2026-04-05 22:33 by 范式思维
[考研] 材料工程302分求调剂 +9 zyx上岸！ 2026-04-04 9/450 2026-04-05 22:08 by 醉翁wl
[考研] 277求调剂 数一104分 +6 瓶子PZ 2026-04-05 6/300 2026-04-05 20:38 by 啵啵啵0119
[考研] 一志愿同济大学323分（080500）求调剂 +8 yikeniu 2026-04-01 8/400 2026-04-05 18:15 by cql1109
[考研] 282求调剂 +7 aaa车辆 2026-04-02 11/550 2026-04-05 17:24 by yulian1987
[考研] 301求调剂 +12 121. 2026-04-04 12/600 2026-04-05 09:00 by 来看流星雨10
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 10/500 2026-04-04 23:12 by 无际的草原
[考研] 295求调剂 +4 A你好研究生 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:46 by yu221
[考研] 一志愿东北大学085901土木专硕345求调剂 +3 zxt11111 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:21 by 土木硕士招生
[考研] 268求调剂 +8 你好tg 2026-04-03 9/450 2026-04-04 05:08 by gswylq
[考研] 282求调剂 +20 ycy1201 2026-04-01 22/1100 2026-04-04 00:42 by userper
[考研] 考研求调剂 +3 木心想继续深造 2026-04-03 3/150 2026-04-03 21:56 by 啵啵啵0119
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +8 邱gl 2026-03-30 16/800 2026-04-01 17:58 by 邱gl
[考研] 一志愿西交大080500材料学硕349 +6 jqx1258 2026-03-31 7/350 2026-03-31 21:08 by yuq
[考研] 复试调剂 +7 双马尾痞老板2 2026-03-31 7/350 2026-03-31 19:49 by Dyhoer
[考研] 274求调剂 +6 xiao爱同学 2026-03-30 6/300 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 一志愿中海洋320化学工程与技术学硕求调剂 +8 披星河 2026-03-30 8/400 2026-03-31 08:53 by lbsjt
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭