| 查看: 1831 | 回复: 3 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
载体构建技术请教，如何设计引物提取基因插入载体中？
|
|||
|
现在的目的是： 1、从人的细胞中获取MUC1基因的序列，这一步需要说一下引物设计方面信息，有个问题，除了设计出引物P出基因的CDS序列之外，肯定是需要在这个CDS序列前后加入酶切位点的，但是本身基因没有酶切位点，这个怎么才能加上酶切位点？ 2、vector的酶切酶连，酶切就是容易，但是选择的酶切类型应该要与之前P出的基因加上去两端的酶切位点一致的，是吧？ 3、如果是做shRNA和microRNA研究，序列怎么添加酶切位点？ 最好举个例。 回答的箱子有额外加分。 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有298人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助-基因克隆及引物设计的问题
已经有6人回复
- 要P一段基因全长，已知CDS，怎么设计引物啊？
已经有10人回复
- 关于PCR引物设计及添加酶切位点和保护碱基的问题
已经有4人回复
- 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）
已经有8人回复
- 【求助/交流】怎样设计目的基因的引物
已经有8人回复
- 【求助/交流】（引物设计）怎么防止pET28a中Nco1的ATG影响目的基因的表达？
已经有9人回复
- 【求助/交流】基因克隆设计引物
已经有7人回复
- 【求助】求教基因克隆中的引物设计问题【有效期至2010年11月18日】
已经有6人回复
- 【求助/交流】求助：关于做过量表达的基因的引物设计！
已经有4人回复
- 【求助/交流】新手请教如何对不同物种中某一酶的氨基酸序列进行比对再设计简并引物啊�
已经有10人回复
- 急求：构建载体时引物设计的问题
已经有7人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
3楼2012-01-09 23:11:29
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+3): 鼓励新虫发帖哦，GOOD! 2012-01-09 09:44:13
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+3): 鼓励新虫发帖哦，GOOD! 2012-01-09 09:44:13
|
看来这个问题没人回答，我就答一下吧，楼主应该是不常做分子这一块的实验吧。这个问题的解决思路是： 1、分析你想要做的基因的序列的限制性酶切图谱和你要用到的载体的多克隆位点，选取两个你基因上没有酶切位点但是载体的多克隆位点上有的酶切位点，而且这两个酶最好是常用的，可以双酶切的。 2、设计引物，将酶切位点加在你设计的上下游引物上，此时你要确定载体上多克隆位点的表达是有方向的，哪个酶切位点在前面你就把哪个酶切位点放在上游引物上，后面的放在下游引物上。你也可以在引物的酶切位点上加上保护碱基。 3、用引物pcr扩增目的基因，将其连在克隆载体上，如果引物上有保护碱基的话也可以直接将PCR产物酶切，与酶切之后的载体连接，然后转化大肠杆菌就可以了。 |
2楼2012-01-08 21:56:49
4楼2012-01-10 11:48:16
