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dqvictory

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教各位大师,我设计加了标签蛋白的引物,请您帮忙分析下可用不,拜谢� 已有4人参与

各位大师好!小弟设计了加了His标签蛋白的引物,请您帮忙分析下这对引物可用么?如何确定PCR反应体系,用哪种酶?退火温度用多少?

5'GGGACTAGTTCAATGATGATGATGATGATGATGCAGGTAGATCTC3'

5'CCGCGGGAATTCCATATGATGACATTGAAACTGC3'

primer5.0显示这对引物的Tm值和GC含量分别为80.4, 42.2%和79.8, 47.1%。Tm值是否太高了呢?这对引物能扩增出引物吗?

还望各位大师指点,谢谢您了!!
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有点高
海纳百川止于至善
2楼2010-10-13 19:35:39
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

谢斑竹了!那这对引物可用么?
把记忆随身携带!
3楼2010-10-13 21:15:31
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流,欢迎常来~ 2010-10-14 08:36:00
我也这么设计过,扩增没有问题,Tm按照低的那个来。
Thank-you,so-blue.
4楼2010-10-13 23:05:21
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

太感谢您了,我试试看!
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5楼2010-10-13 23:25:30
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

susizheng ~我还想请教您,您用的什么酶呢?
把记忆随身携带!
6楼2010-10-13 23:27:42
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by dqvictory at 2010-10-13 23:27:42:
susizheng ~我还想请教您,您用的什么酶呢?

看你片段大小了,一般1-2K左右的,我用probest,长片段4-5K的我用La-Taq。
Thank-you,so-blue.
7楼2010-10-14 10:13:53
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)

退火温度高不怕,特异性更好啊。
8楼2010-10-14 11:43:50
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dqvictory

铁虫 (小有名气)

好的,谢谢各位了!十分感谢!
我的目的片段是400bp的。
把记忆随身携带!
9楼2010-10-15 17:50:01
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