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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）
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jm0305100303

新虫 (小有名气)

[求助] 已经带his标签目的蛋白基因如何设计引物啊（目的基因已经接在pET-22b的载体上了）

分子生物学的新手，正学习设计引物，向各位大侠求助啊……
利用pET-22b的重组质粒去pcr，希望得到带组氨酸标签的目的蛋白基因，因为组氨酸标签用的是CAC，所以设计出来的引物GC%偏高（66.7%），Tm值79.2(上游引物的tm值才56.7，差20多度……)，引物里面就是保护碱基（3bp）+酶切位点（6bp）+终止密码子（3bp）+5个GTG（15bp）的重复，一共27个bp，不知道这样的引物能不能p出目的基因来啊，如果能p出来，退火温度应该用多少呢？

[ Last edited by jm0305100303 on 2011-9-19 at 13:09 ]
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1楼 2011-09-19 12:57:19
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★
dhd997(金币+3): 2011-09-21 07:53:54
现在的酶都很好了，PCR是越来越容易了。我们经常做的PCR，一条引物50bp，一条20bp，Primer Premier评分不超过5分，一样能做出来。你这不是很大的问题，按普通PCR的程序去做就是了，退火温度先用常规的55℃，不行的话再试下50℃。
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3楼2011-09-20 17:55:13
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by jm0305100303 at 2011-09-20 20:55:36:
想给你金币 说是不是回复求助帖 不能给……

没有技术含量的回答，就没想要你金币，所以选的就是“不应助”，哈哈~
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6楼2011-09-20 21:04:55
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