应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 想给自己的蛋白加个HIS标签？方法。。。。
91/1返回列表
查看: 4630  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

[求助] 想给自己的蛋白加个HIS标签？方法。。。。

自己有个重组质粒，带GST标签的蛋白，GST是质粒自身带的。能不能想个办法不要GST标签而换成HIS呢？ 还有his标签怎么加？？
我只想到了换种质粒。。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我会绕一个圈，走回到实验室
1楼 2011-08-15 10:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): good 2011-08-15 13:03:50
可以在设计引物的时候加在基因前边，然后用LIC的方法连到目的载体上。
赞一下(1人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-08-15 11:23:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
loveskyzhou(金币+1): 2011-08-15 12:36:23
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-08-15 13:04:02
楼主也可以先转到pet28等待有His的质粒上，在设计引物扩增！
赞一下(1人) 回复此楼
jiayoubashaonian
3楼2011-08-15 11:39:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
loveskyzhou(金币+1): 2011-08-15 12:36:30
西瓜(金币+2): 柯南君好久不见啊 2011-08-15 13:04:16
可以在设计引物的时候在引物上加标签
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-08-15 12:11:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by elvias at 2011-08-15 12:11:56:
可以在设计引物的时候在引物上加标签

设计引物中的组氨酸序列随便写么还是有特殊的？ 还有就是位置是怎样的 紧挨着目的片段吗
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
5楼2011-08-15 12:37:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good 2011-08-15 13:04:31
替换
用引物带上His tag。然后使用酶切或者其他方法，把his-目的基因，替换GST tag。
最方便的应该就是酶切了，找一个GST tag前合适的酶切位点，就OK了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-08-15 12:56:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
引用回帖:
5楼: Originally posted by loveskyzhou at 2011-08-15 12:37:21:
设计引物中的组氨酸序列随便写么还是有特殊的？ 还有就是位置是怎样的 紧挨着目的片段吗

看你下面做什么实验了，我们一般都是将TEV或者thrombin的酶切位点跟在His后面，方便到时候切标签。
赞一下 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
7楼2011-08-15 13:06:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveskyzhou

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by roomofxw at 2011-08-15 12:56:26:
替换
用引物带上His tag。然后使用酶切或者其他方法，把his-目的基因，替换GST tag。
最方便的应该就是酶切了，找一个GST tag前合适的酶切位点，就OK了

6p-1的GST前没有没切位点啊，中间倒是有，但这样切的话蛋白还是会带一部分GST的序列，还需要酶切，这样的话是不是换载体方便些呢，比如28a的
赞一下 回复此楼
我会绕一个圈，走回到实验室
8楼2011-08-15 13:25:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

roomofxw

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by loveskyzhou at 2011-08-15 13:25:55:
6p-1的GST前没有没切位点啊，中间倒是有，但这样切的话蛋白还是会带一部分GST的序列，还需要酶切，这样的话是不是换载体方便些呢，比如28a的

你要是只是为了要His tag纯化用，那就用引物带上去，或者再带个蛋白酶切位点。即GST-（enzyme site-his）-protein。
要是就不要GST，那有pET载体，当然换质粒最容易。

非要在这个载体上替换的话。GST前面有BspmI酶切位点
觉得这个酶切位点不好用，那就再向上找，PCR把质粒上的片段和目的基因拼上去再连接。
当然也可以把质粒除了GST都P出来，然后和目的基因连接。
再或者自己把启动子RBS基因一起做出来，然后连到载体上。相当于设计个和GST共表达的载体。
赞一下 回复此楼
9楼2011-08-15 13:37:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 loveskyzhou 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 8/400 2026-08-02 18:24 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 9/450 2026-08-02 18:23 by ca3DVAx4OB19
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 10/500 2026-08-02 18:18 by ca3DVAx4OB19
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 AS6fX1tr1on4 2026-08-02 13/650 2026-08-02 18:14 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 16/800 2026-08-02 18:12 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 14/700 2026-08-02 18:11 by ca3DVAx4OB19
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 16/800 2026-08-02 18:11 by ca3DVAx4OB19
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[博后之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:04 by ca3DVAx4OB19
[考博] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 20/1000 2026-08-02 18:03 by ca3DVAx4OB19
[基金申请] 准备明年的基金了 +7 Tide man 2026-07-27 7/350 2026-08-02 16:43 by gltch
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 15/750 2026-08-02 16:23 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +18 低垂的野花 2026-07-31 24/1200 2026-08-02 16:03 by swallowwh
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cBGhfJFuNMca 2026-08-02 12/600 2026-08-02 13:43 by jHcrHMhbKCFV
[基金申请] 2026年国自然面上资助率 +15 布布和一二 2026-07-30 21/1050 2026-08-02 10:56 by iaeyuan
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
[基金申请] 这种情况还有戏吗 +5 drbart 2026-07-27 11/550 2026-07-29 05:50 by drbart
[基金申请] 同事接到电话了，我却没有 +4 1234567wang 2026-07-27 4/200 2026-07-28 10:11 by GOODLUCKER
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭