应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】his标签蛋白纯化
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/1返回列表
查看: 2182  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dianaofyezi

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】his标签蛋白纯化

最近在做几种蛋白的纯化，咪唑浓度在调整，但是在目的蛋白的上面总是出现同样大小的非特异性条带，浓度不是很高，是不是可能是菌体蛋白呢？如何除去这个杂带呢？请高人支招。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-30 08:43:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gppwfh

金虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 有道理 2011-03-30 09:49:32
dianaofyezi(金币+1): 谢谢你中肯的意见。后续实验中要求蛋白纯度比较高，还是要去除杂带才行哦。 2011-03-30 11:51:06
只做一次his纯化，不一定能把所有杂带除去。有可能是杂带具有相似的his结构，也同样结合到纯化柱上了。 建议先做个WB看看，如果不影响目的蛋白活性及后续实验，其实也不用全部去除杂带的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-30 08:53:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)
楼主纯化出来的蛋白后续做什么实验
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-30 15:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qjy_134 at 2011-03-30 15:06:41:
楼主纯化出来的蛋白后续做什么实验

要先切除his标签，然后测定蛋白活力，然后还要上细胞。
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-30 15:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
dianaofyezi(金币+2): 谢谢你的指点，理论上感觉可行。 2011-03-30 18:15:19
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-28 13:44:29
切除标签之后再过一次Ni-NTA，反穿出来的就是你的目的蛋白，挂柱的是杂蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-30 15:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
dianaofyezi(金币+1): 谢谢！ 2011-03-31 10:44:58
5楼正解，切后上柱再收流穿就行了
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-30 16:26:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜雨再来

木虫 (小有名气)
楼主问一下，这种技术吸附蛋白的话，是不是很容易脱落？
赞一下 回复此楼
7楼2011-03-30 16:39:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 夜雨再来 at 2011-03-30 16:39:59:
楼主问一下，这种技术吸附蛋白的话，是不是很容易脱落？

没有明白啥意思？你是指配基容易脱落还是待纯化的蛋白呢？
赞一下 回复此楼
8楼2011-03-30 18:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
不知道有没有纯化方面的修改意见呢？
赞一下 回复此楼
9楼2011-03-31 08:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
dianaofyezi(金币+1): 谢谢中肯的意见。 2011-03-31 08:42:55
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-28 13:44:53
加一点triton 100吧，洗杂的时候
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-03-31 08:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
dianaofyezi(金币+1): 谢谢你的建议！我尝试看看。 2011-03-31 10:40:41
lstt09nk(金币+3): 热心 2011-04-28 13:45:24
单独的亲和层析很难获得纯度很高的蛋白。

不过就你现在的状态可以给你个建议：直接用蛋白酶柱上切除标签，只有目的蛋白可以掉下来。你平常咪唑洗脱的杂蛋白没有切点，就留在柱子上了。如果做的好了能极大提高蛋白的纯度！！！
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-03-31 09:49:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyang1986

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问楼主切除组氨酸标签用什么酶啊？
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-04-27 15:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dianaofyezi13楼
2011-04-27 21:42   回复  
Xa
相关版块跳转 我要订阅楼主 dianaofyezi 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 工科370求调剂 +3 溏心煎鸡蛋 2026-04-05 3/150 2026-04-06 10:55 by 这是一个无聊的�
[考研] 0703化学 +17 妮妮ninicgb 2026-04-04 18/900 2026-04-06 10:41 by 大力水手力大无�
[考研] 生物与医药273求调剂 +7 荔题南墙 2026-04-05 7/350 2026-04-06 09:26 by 286640313
[考研] 322求调剂 +3 嗯哼哼恒 2026-04-05 3/150 2026-04-05 19:52 by nepu_uu
[考研] 346分的生物与医药08600求调剂 +5 常雨阳上岸 2026-04-05 6/300 2026-04-05 13:42 by imissbao
[考研] 298求调剂 +7 manman511 2026-04-05 7/350 2026-04-05 10:29 by 唐沐儿
[考研] 环境285分，过六级，求调剂 +10 xhr12 2026-04-02 10/500 2026-04-04 21:53 by bn53987
[考研] 316求调剂 +9 墨辰_Orion926 2026-04-04 9/450 2026-04-04 21:35 by lbsjt
[论文投稿] 求文献 5+3 ys879651$ 2026-04-02 3/150 2026-04-04 17:22 by bobvan
[考研] 一志愿北京科技大学材料工程085601，求调剂 +17 cdyw 2026-04-02 18/900 2026-04-04 11:14 by w_xuqing
[考研] 本科985，专业0812分336求调剂 +4 莫莫很行 2026-04-03 4/200 2026-04-03 21:31 by zhq0425
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 一志愿安徽大学0817化学工程与技术，求调剂 +14 我不是只因 2026-04-02 15/750 2026-04-03 09:49 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿陕西师范大学生物学317分 +5 1563日。 2026-04-02 5/250 2026-04-03 06:58 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿华南师范大学-22408计算机-292分-求华南师范大学调剂 +4 爱读书的小鳄鱼 2026-04-02 4/200 2026-04-02 18:35 by 求调剂zz
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 本2一志愿C9-333分，材料科学与工程，求调剂 +9 升升不降 2026-03-31 9/450 2026-03-31 18:01 by 无际的草原
[考研] 254材料与化工求调剂 +3 翰冬林楠 2026-03-30 4/200 2026-03-31 17:53 by yishunmin
[考研] 297 地理学070500 复试求调剂 +3 小圆圈圈ooo 2026-03-30 3/150 2026-03-30 21:05 by 余震yz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭