应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】his标签蛋白纯化
131/1返回列表
查看: 2423  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

dianaofyezi

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】his标签蛋白纯化

最近在做几种蛋白的纯化，咪唑浓度在调整，但是在目的蛋白的上面总是出现同样大小的非特异性条带，浓度不是很高，是不是可能是菌体蛋白呢？如何除去这个杂带呢？请高人支招。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-03-30 08:43:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gppwfh

金虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 有道理 2011-03-30 09:49:32
dianaofyezi(金币+1): 谢谢你中肯的意见。后续实验中要求蛋白纯度比较高，还是要去除杂带才行哦。 2011-03-30 11:51:06
只做一次his纯化，不一定能把所有杂带除去。有可能是杂带具有相似的his结构，也同样结合到纯化柱上了。 建议先做个WB看看，如果不影响目的蛋白活性及后续实验，其实也不用全部去除杂带的。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-03-30 08:53:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qjy_134

铜虫 (小有名气)
楼主纯化出来的蛋白后续做什么实验
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-30 15:06:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by qjy_134 at 2011-03-30 15:06:41:
楼主纯化出来的蛋白后续做什么实验

要先切除his标签，然后测定蛋白活力，然后还要上细胞。
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-30 15:41:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
dianaofyezi(金币+2): 谢谢你的指点，理论上感觉可行。 2011-03-30 18:15:19
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-28 13:44:29
切除标签之后再过一次Ni-NTA，反穿出来的就是你的目的蛋白，挂柱的是杂蛋白。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-30 15:52:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
dianaofyezi(金币+1): 谢谢！ 2011-03-31 10:44:58
5楼正解，切后上柱再收流穿就行了
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-30 16:26:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜雨再来

木虫 (小有名气)
楼主问一下，这种技术吸附蛋白的话，是不是很容易脱落？
赞一下 回复此楼
7楼2011-03-30 16:39:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 夜雨再来 at 2011-03-30 16:39:59:
楼主问一下，这种技术吸附蛋白的话，是不是很容易脱落？

没有明白啥意思？你是指配基容易脱落还是待纯化的蛋白呢？
赞一下 回复此楼
8楼2011-03-30 18:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)
不知道有没有纯化方面的修改意见呢？
赞一下 回复此楼
9楼2011-03-31 08:24:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
dianaofyezi(金币+1): 谢谢中肯的意见。 2011-03-31 08:42:55
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-28 13:44:53
加一点triton 100吧，洗杂的时候
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-03-31 08:28:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
dianaofyezi(金币+1): 谢谢你的建议！我尝试看看。 2011-03-31 10:40:41
lstt09nk(金币+3): 热心 2011-04-28 13:45:24
单独的亲和层析很难获得纯度很高的蛋白。

不过就你现在的状态可以给你个建议：直接用蛋白酶柱上切除标签，只有目的蛋白可以掉下来。你平常咪唑洗脱的杂蛋白没有切点，就留在柱子上了。如果做的好了能极大提高蛋白的纯度！！！
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2011-03-31 09:49:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuyang1986

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
请问楼主切除组氨酸标签用什么酶啊？
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-04-27 15:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
dianaofyezi13楼
2011-04-27 21:42   回复  
Xa
相关版块跳转 我要订阅楼主 dianaofyezi 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 06:42 by xxniao123
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +3 a089 2026-08-26 3/150 2026-08-26 23:21 by young90
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +4 yuleib84 2026-08-26 5/250 2026-08-26 13:40 by yuleib84
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +4 叶九微 2026-08-26 4/200 2026-08-26 10:52 by xiacongxu
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +3 苏东坡二世 2026-08-23 3/150 2026-08-25 10:35 by shisan1313
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭