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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】his标签蛋白纯化

最近在做几种蛋白的纯化，咪唑浓度在调整，但是在目的蛋白的上面总是出现同样大小的非特异性条带，浓度不是很高，是不是可能是菌体蛋白呢？如何除去这个杂带呢？请高人支招。

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1楼 2011-03-30 08:43:12

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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

★
dianaofyezi(金币+2): 谢谢你的指点，理论上感觉可行。 2011-03-30 18:15:19
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-28 13:44:29

切除标签之后再过一次Ni-NTA，反穿出来的就是你的目的蛋白，挂柱的是杂蛋白。

赞一下(1人)

5楼2011-03-30 15:52:49

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查看全部 13 个回答

gppwfh

金虫 (正式写手)

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★ ★
lstt09nk(金币+2): 有道理 2011-03-30 09:49:32
dianaofyezi(金币+1): 谢谢你中肯的意见。后续实验中要求蛋白纯度比较高，还是要去除杂带才行哦。 2011-03-30 11:51:06

只做一次his纯化，不一定能把所有杂带除去。有可能是杂带具有相似的his结构，也同样结合到纯化柱上了。建议先做个WB看看，如果不影响目的蛋白活性及后续实验，其实也不用全部去除杂带的。

赞一下(1人)

2楼2011-03-30 08:53:06

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qjy_134

铜虫 (小有名气)

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楼主纯化出来的蛋白后续做什么实验

3楼2011-03-30 15:06:41

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dianaofyezi

金虫 (正式写手)

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引用回帖:

Originally posted by qjy_134 at 2011-03-30 15:06:41:
楼主纯化出来的蛋白后续做什么实验

要先切除his标签，然后测定蛋白活力，然后还要上细胞。

4楼2011-03-30 15:41:12

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