| 查看: 2587 | 回复: 9 | |||
[交流]
【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
|
|
求助关于his-tagged 蛋白纯化（变性条件下） 怎样得到高纯度的目的蛋白 知识经验或专门文献 [ Last edited by 543608268 on 2011-1-19 at 14:02 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有262人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于Ni-NTA纯化蛋白
已经有19人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 关于his-tag蛋白的分离和纯化 微生物产生！文献多多益善
已经有10人回复
- 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
已经有10人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 有谁用过国产的His蛋白纯化试剂盒
已经有7人回复
- 关于蛋白纯化的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于蛋白纯化
已经有30人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
- 蛋白质纯化技术十分全面的好网站!!!!!!!!!!!!
已经有245人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
材料/化学相关专业2026级学术/专业型硕士研究生
+1/82
-
郑州大学付永柱课题组诚招2026年入学博士生
+1/82
-
【武汉高校】【新能源材料与器件课题组】 招收优秀硕士调剂生！！！
+5/70
-
加拿大阿尔伯塔大学招收电磁、无线通信、机器学习方向全奖硕士/博士/博士后/访问学者
+1/57
-
招硕士调剂生
+2/34
-
2026年工科硕士调剂-上海大学全国重点实验室团队-材料数据挖掘方向-研究生3-5人
+1/32
-
澳大利亚西澳大学（UWA）张金强课题组招收全奖博士生（化工新能源方向）
+1/27
-
加拿大阿尔伯塔大学招收电磁、无线通信、机器学习方向全奖硕士/博士/博士后/访问学者
+2/22
-
西京学院土木水利 2026 级研究生招生相关说明
+1/8
-
青岛科技大学高分子学院---生物大分子医学（BM3)团队---招收硕士生和博士生
+1/7
-
26年申博自荐-计算机视觉
+1/7
-
双一流天津工业大学电信学院李鸿强教授招收2026年申请审核制博士3名
+1/7
-
复旦大学集成电路学院程增光课题组急聘科研助理
+1/6
-
福建师范大学 院士团队 招2026级博士1名
+1/5
-
中国石油大学（北京）国家级大人才团队博士招生3名：化学、材料、石油工程：油田化学
+1/4
-
海南大学徐月山老师招生第二批博士名额2~3个，2026年9月份入学（高端设备开发方向）
+1/3
-
药学专硕一志愿苏大本科苏大寻求B区高校调剂名额
+1/2
-
085404 270求调剂，b区求导师收留接受跨专业
+1/2
-
东北农业大学（211）水利工程招生
+1/1
-
温州大学招收2026年入学博士研究生（化学、材料、环境）
+1/1
2楼2011-01-19 13:49:42
543608268(金币+5): 2011-01-19 13:58:27
|
本帖内容被屏蔽 |
3楼2011-01-19 13:54:30
4楼2011-01-20 15:16:44
5楼2011-01-20 18:27:06
6楼2011-01-20 19:55:09
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
本帖内容被屏蔽 |
7楼2011-01-21 09:36:44
关于蛋白质纯化的实验
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+3): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 22:29:56
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
rainwander(金币+3): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-23 22:29:56
|
这是我最近用的实验步骤，可能对你有帮助，我用的镍柱试剂盒，不知你的实验方法是什么，有机会多多交流。 Ni2+柱的分离纯化 1. 轻轻颠倒混匀固化Ni2+树脂，取2ml装入层析住，树脂自然沉降。 2. 用3倍体积的无菌水冲洗树脂。 3. 用3倍体积的结合缓冲液平衡树脂，放置待第9步使用。 4. 每100 ml细胞培养物的细菌沉淀悬于4 ml结合缓冲液（pH 7.8） 5. 加入溶菌酶至1mg/ml，冰上放置30min。 6. 混合物与4℃摇床上孵育10min。 7. 加入Triton X-100、Dnase和Rnase，终浓度分别为1％、5 ug/ml、5 ug/ml，在于4℃摇床上孵育10min。 8. 4℃ 5000r/min，离心3min, 去处不溶性细胞碎片。上清转移到一新管中。 9. 树脂上的结合缓冲液引流到柱顶部。 10. 步骤8获得的细胞裂解液上清上柱，流速调整为每小时10个柱体积。 11. 用6个柱体积的结合缓冲液（ph 7.8 ）洗柱。 12. 用4个柱体积的洗涤缓冲液（ph 6.0）洗柱，直至流过液A280<0.01。 13. 用6个柱体积的10mmol/L咪唑洗脱缓冲液洗脱结合的蛋白，每份1 ml分布收集，检测A280。 14. 用咪唑浓度更高的洗脱缓冲液重复步骤13。 15. 用20 ul 等分的蛋白进行10％SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，分析聚组氨酸标签蛋白的分布。 |
8楼2011-01-23 21:20:25
9楼2013-05-17 12:40:41
10楼2013-05-31 13:02:21
