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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

[交流] 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化

ni是与组氨酸残基中咪唑环结合，那么当带有高浓度的咪唑溶液洗脱时，咪唑与his-tag的咪唑环竞争结合ni,所有蛋白才会被洗脱下来，但是存在一个问题，咪唑完全跟ni结合了，第二次上样的时候，带his-tag的蛋白怎么跟镍柱结合呀，因为镍都被咪唑结合着，用什么方法再把咪唑洗脱下来呢？请各位高手指教！
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1楼 2011-10-12 17:43:54
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sfb1020

金虫 (小有名气)
★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
丫头7976(金币+1): 每次进完一次样都要再生么 岂不是很麻烦 2011-10-13 08:12:10
柱子需要再生
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2楼2011-10-12 18:40:05
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
丫头7976(金币+1): 灭菌水和乙醇能把镍洗干净吗，得用EDTA，把镍洗下来顺便就把咪唑洗下来了吧 2011-10-13 08:13:40
lstt09nk(金币+1): 鼓励参与 2011-10-13 10:35:26
分别用灭菌水和20%乙醇洗柱子若干次，让柱子再生。
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3楼2011-10-12 20:45:16
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
再生后在过柱子吧
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4楼2011-10-12 22:06:29
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doublehelix

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流，欢迎常来 2011-10-13 10:35:11
柱子需要再生，先变性，再经过一系列的洗脱等程序...
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5楼2011-10-12 23:18:56
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sfb1020

金虫 (小有名气)
丫头7976(金币+1): 乙醇是干嘛用的 一般不都是用EDTA洗下来，再重新上镍吗？请指教 2011-10-19 07:55:55
每用一次就要再生一次，用一系列不同浓度的乙醇
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7楼2011-10-18 12:46:50
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liyonglix99

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
丫头7976(金币+1): 恩 这个我知道 GE柱子说明书有 2011-10-21 08:19:33
silicare(金币+2): 鼓励发帖交流 2011-11-07 14:58:20
有strip buffer 重新去掉咪唑的
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8楼2011-10-19 10:13:12
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Catherine圆

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
silicare(金币+2): 鼓励发帖交流 2011-11-07 14:58:10
Ni-NTA说明书里有洗脱方法呀，11个步骤
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9楼2011-11-07 11:00:09
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抗体磷酸化

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
怎么不用His,的亲和填料呢？
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10楼2011-12-14 09:31:53
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rtt0325

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我们就用水洗……好像水洗的时候咪唑浓度降低，它自然就下来了，我们用几次后才会再生一次，这之间都是用水洗洗就成
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11楼2012-01-08 14:34:06
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简单回复
nach6楼
2011-10-12 23:54   回复  
丫头7976(金币+1):谢谢参与
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