24小时热门版块排行榜    

查看: 1481  |  回复: 9

merryjuna

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题已有5人参与

我想知道洗脱过程中咪唑最高浓度可达到多少?如果方便帮忙给出示例文献(刊名,年卷期就可以)或参考书,我做蛋白质修饰的过程中用到咪唑,希望通过这个证明高浓度咪唑下蛋白质不会变性
网络上查到有1M的,但不知道哪里找参考文献?或者是否有更高?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zheng20089829

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 18:54:56
1M太高了吧,我有蛋白两个组氨酸尾巴500mM就可以了,为什么用那么高浓度啊?
2楼2010-10-19 16:15:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merryjuna

银虫 (小有名气)

先谢谢你,我不是这么高浓度咪唑纯化蛋白,而是修饰中用到这么高的咪唑,简单来说有一步化学反应需要这么高的咪唑浓度
引用回帖:
Originally posted by zheng20089829 at 2010-10-19 16:15:58:
1M太高了吧,我有蛋白两个组氨酸尾巴500mM就可以了,为什么用那么高浓度啊?

3楼2010-10-19 16:22:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zheng20089829

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这样啊,不好意思,没看清楚。我用500 的纯化测酶的活性基本没有影响,1M就不清楚了,不行实践一下,呵呵
4楼2010-10-19 16:52:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王会征

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 18:55:14
1M完全可以,不过会把杂蛋白洗下来啊。建议做一下咪唑梯度洗脱。
5楼2010-10-19 17:00:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merryjuna

银虫 (小有名气)

谢谢啊,你见过蛋白质相关的实验中最高浓度的咪唑是多少啊?我不是用来做蛋白质洗脱的,只为了找到一个不会使蛋白质变性的咪唑浓度
引用回帖:
Originally posted by 王会征 at 2010-10-19 17:00:02:
1M完全可以,不过会把杂蛋白洗下来啊。建议做一下咪唑梯度洗脱。

6楼2010-10-19 17:42:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

merryjuna

银虫 (小有名气)

确实做个实验室最简单的,但我的主要方向还是化学,动不动就拿蛋白试试的条件暂时还不满足,所以先来问问....不管怎么样,还是谢谢你啊
引用回帖:
Originally posted by zheng20089829 at 2010-10-19 16:52:27:
这样啊,不好意思,没看清楚。我用500 的纯化测酶的活性基本没有影响,1M就不清楚了,不行实践一下,呵呵

7楼2010-10-19 17:43:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 18:55:27
在我的概念中我把咪唑当做一种盐去计算浓度,在我使用的范围内1M没问题。这这针对我的蛋白!
楼主的蛋白需要自己去做一些尝试,别人给你的浓度参考价值并不大!
8楼2010-10-19 18:02:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zheng20089829

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by merryjuna at 2010-10-19 17:43:46:
确实做个实验室最简单的,但我的主要方向还是化学,动不动就拿蛋白试试的条件暂时还不满足,所以先来问问....不管怎么样,还是谢谢你啊

不客气的,蛋白这个东西可比性不太强,有的容易降解有的会好点,先做做试试吧
9楼2010-10-22 13:51:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongmings

木虫之王 (文学泰斗)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这个因蛋白而异,一般来说,1M的浓度有些高。一般用于纯化的是0.5M的,通常80%以下,也就是0.4M以下就能洗脱下来。
10楼2014-10-22 13:25:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 merryjuna 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 化学口B0109(高分子合成),拿青年基金一般需要怎样的文章水平? +13 salmon95 2024-05-30 22/1100 2024-06-01 21:22 by salmon95
[考研] 研0二导师分到新来的博士后靠谱吗 +7 sone9 2024-05-31 7/350 2024-06-01 19:10 by 梦燕园
[教师之家] 研究生在毕业答辩时挂了,遗憾 +10 spacr2022 2024-05-27 13/650 2024-06-01 17:45 by keyaner23
[硕博家园] 2024博士招生 +4 big 混子 2024-05-26 4/200 2024-06-01 17:37 by czp97
[考博] 24or25材料专业申博 +4 农夫三拳有点痛 2024-05-30 11/550 2024-06-01 14:45 by Napoleonsky
[基金申请] 数理的人才答辩通知发了吗 +7 yzy3327 2024-05-30 7/350 2024-06-01 09:15 by 撒哈拉西部
[硕博家园] 讨厌酒桌文化 +6 hahamyid 2024-05-31 6/300 2024-06-01 09:03 by lizhiweiouc
[教师之家] 选择 +6 459582015 2024-05-31 6/300 2024-06-01 07:32 by otani
[教师之家] 中年 (金币+3) +18 459582015 2024-05-28 19/950 2024-06-01 00:41 by 沈婉婷.Girl
[硕博家园] 求问endnote上Wiley引用格式在哪下载 +3 Elon. 2024-05-30 3/150 2024-05-31 10:13 by crazy peng
[文学芳草园] 对对子啊 +5 天若孤独 2024-05-29 7/350 2024-05-31 09:00 by wjykycg
[基金申请] 入职高校3年发表10+SCI,尽人事听天命 +29 kaoyan250 2024-05-27 40/2000 2024-05-31 08:44 by Xiaolin81
[材料综合] 真空封石英管 北京 +4 dessha 2024-05-29 5/250 2024-05-30 16:40 by mpdfwxgui
[电化学] 有锂金属软包电池代工公司代做软包嘛 +5 yyywj995 2024-05-26 6/300 2024-05-30 08:33 by 那年的旧城
[有机交流] 液相纯度高,但产品析不太出来 10+4 cui19236 2024-05-27 9/450 2024-05-30 07:45 by yuanjijoy
[基金申请] 信息学部函评结束了吗? +6 ducan21 2024-05-28 7/350 2024-05-29 12:10 by WORLD0256
[论文投稿] 核心初审被拒,理由是“选题的意义不明确,文章写得不像是科技论文”,怎么改 5+3 工藤雷花樱 2024-05-27 8/400 2024-05-29 10:09 by topedit
[论文投稿] EI学报,一审返修后,为啥不再送审,直接终审中? +4 qweasd12345 2024-05-27 6/300 2024-05-29 00:02 by dut_ameng
[有机交流] 奇怪的物质 100+4 桃桃PXS 2024-05-27 7/350 2024-05-28 10:22 by 091602
[硕博家园] 课题做到一半担心做不出来怎么办 +4 mkpooooo 2024-05-27 7/350 2024-05-27 11:56 by kanmiaolucky
信息提示
请填处理意见