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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题
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merryjuna

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】请教一个his-tag蛋白质纯化问题 已有5人参与

我想知道洗脱过程中咪唑最高浓度可达到多少？如果方便帮忙给出示例文献（刊名，年卷期就可以）或参考书，我做蛋白质修饰的过程中用到咪唑，希望通过这个证明高浓度咪唑下蛋白质不会变性
网络上查到有1M的，但不知道哪里找参考文献？或者是否有更高？
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1楼 2010-10-19 16:13:23
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 18:54:56
1M太高了吧，我有蛋白两个组氨酸尾巴500mM就可以了，为什么用那么高浓度啊？
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2楼2010-10-19 16:15:58
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merryjuna

银虫 (小有名气)
先谢谢你，我不是这么高浓度咪唑纯化蛋白，而是修饰中用到这么高的咪唑，简单来说有一步化学反应需要这么高的咪唑浓度
引用回帖:
Originally posted by zheng20089829 at 2010-10-19 16:15:58:
1M太高了吧，我有蛋白两个组氨酸尾巴500mM就可以了，为什么用那么高浓度啊？

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3楼2010-10-19 16:22:17
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这样啊，不好意思，没看清楚。我用500 的纯化测酶的活性基本没有影响，1M就不清楚了，不行实践一下，呵呵
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4楼2010-10-19 16:52:27
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 18:55:14
1M完全可以，不过会把杂蛋白洗下来啊。建议做一下咪唑梯度洗脱。
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5楼2010-10-19 17:00:02
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merryjuna

银虫 (小有名气)
谢谢啊，你见过蛋白质相关的实验中最高浓度的咪唑是多少啊？我不是用来做蛋白质洗脱的，只为了找到一个不会使蛋白质变性的咪唑浓度
引用回帖:
Originally posted by 王会征 at 2010-10-19 17:00:02:
1M完全可以，不过会把杂蛋白洗下来啊。建议做一下咪唑梯度洗脱。

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6楼2010-10-19 17:42:14
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merryjuna

银虫 (小有名气)
确实做个实验室最简单的，但我的主要方向还是化学，动不动就拿蛋白试试的条件暂时还不满足，所以先来问问....不管怎么样，还是谢谢你啊
引用回帖:
Originally posted by zheng20089829 at 2010-10-19 16:52:27:
这样啊，不好意思，没看清楚。我用500 的纯化测酶的活性基本没有影响，1M就不清楚了，不行实践一下，呵呵

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7楼2010-10-19 17:43:46
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-19 18:55:27
在我的概念中我把咪唑当做一种盐去计算浓度，在我使用的范围内1M没问题。这这针对我的蛋白！
楼主的蛋白需要自己去做一些尝试，别人给你的浓度参考价值并不大！
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8楼2010-10-19 18:02:40
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zheng20089829

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by merryjuna at 2010-10-19 17:43:46:
确实做个实验室最简单的，但我的主要方向还是化学，动不动就拿蛋白试试的条件暂时还不满足，所以先来问问....不管怎么样，还是谢谢你啊

不客气的，蛋白这个东西可比性不太强，有的容易降解有的会好点，先做做试试吧
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9楼2010-10-22 13:51:17
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dongmings

木虫之王 (文学泰斗)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个因蛋白而异，一般来说，1M的浓度有些高。一般用于纯化的是0.5M的，通常80%以下，也就是0.4M以下就能洗脱下来。
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10楼2014-10-22 13:25:41
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