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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于his-tag蛋白的分离和纯化 微生物产生！文献多多益善
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cauobama

新虫 (著名写手)

[求助] 关于his-tag蛋白的分离和纯化 微生物产生！文献多多益善

关于his-tag蛋白的分离和纯化 微生物产生！文献多多益善 谢谢！！！
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1楼 2011-11-22 10:39:16
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
amisking(金币+1): 鼓励发帖交流。 2011-11-22 18:05:09
可以看看biobasic公司的NI-NTA sefinose 说明书，
编号为BSP033-2
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2楼2011-11-22 13:43:17
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nmgdwg

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我用的GE 的HisTrap HP, 1 ml

楼主想问啥？说具体点
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3楼2011-11-22 14:45:20
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cauobama

新虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by nmgdwg at 2011-11-22 14:45:20:
我用的GE 的HisTrap HP, 1 ml

楼主想问啥？说具体点

我就是想问问 微生物产生的酶（带有his-tag标签）怎么纯化， 用什么方法最好，或者是说最成熟。 还有到哪能找到这类文献等等。 谢谢
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4楼2011-11-25 10:11:31
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cauobama

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xhjggl at 2011-11-22 13:43:17:
可以看看biobasic公司的NI-NTA sefinose 说明书，
编号为BSP033-2

谢谢
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5楼2011-11-25 10:12:43
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nmgdwg

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

cauobama(金币+1): ★有帮助 2011-12-27 09:52:26
引用回帖:
4楼: Originally posted by cauobama at 2011-11-25 10:11:31:
我就是想问问 微生物产生的酶（带有his-tag标签）怎么纯化， 用什么方法最好，或者是说最成熟。 还有到哪能找到这类文献等等。 谢谢

先看下分子克隆实验指南，冷泉港的蛋白纯化手册等 打打基础
这些资料在资源帖里都能下载，再找找和你的酶  有关的提纯方法
HISTAG 简单说就是，培养→诱导→收集→cell破碎→离心→过柱→wash→洗脱→收集→保存→检测比活
但这里还有太多的细节，就得根据你的 蛋白来 完善每一步啦
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6楼2011-11-25 12:00:17
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wwevehss

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cauobama at 2011-11-25 10:11:31:
我就是想问问 微生物产生的酶（带有his-tag标签）怎么纯化， 用什么方法最好，或者是说最成熟。 还有到哪能找到这类文献等等。 谢谢

可以直接破碎细胞（超声或者细胞破碎器），然后用小的管子装Ni-NTA agarose， 上样，冲洗，EDTA洗脱就好了
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7楼2011-11-25 12:04:39
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

随便在网上搜 Ni-NTA Purification + PDF都会出来一大堆东西。His tag蛋白纯化应该算是最简便嘴成熟的亲和层析纯化方法。不用多多益善，看一两个就OK了。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
8楼2011-11-25 15:44:53
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
这不是一个很成熟的技术吗？
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
9楼2011-11-25 23:50:02
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sspxiaoji

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by cauobama at 2011-11-25 10:11:31:
我就是想问问 微生物产生的酶（带有his-tag标签）怎么纯化， 用什么方法最好，或者是说最成熟。 还有到哪能找到这类文献等等。 谢谢

加了HIS标签，很明显用NI柱先捕获，至于怎么纯化要看酶的性质，要达到什么样的纯度，标签对酶活性有没有影响等决定。
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10楼2011-11-26 14:27:04
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