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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于细菌蛋白质分离纯化
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zhouhou

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] 关于细菌蛋白质分离纯化

细菌蛋白质分离纯化，是一种酶，经过盐析透析后酶活非常非常高，但是经过葡聚糖凝胶层析柱分离后只出现一个峰，而且收集后测酶活几乎没有。。。。。。这是怎么回事呢？目标酶是二聚体，103kd，用的是葡聚糖凝胶G-100.。。。求助各位的大侠
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1楼 2011-05-26 16:53:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
有图没有？G-100柱体积多少？
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2楼2011-05-26 20:06:56
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zhouhou

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-26 20:06:56:
有图没有？G-100柱体积多少？

图现在无法上传，G-100柱高是40cm高，1.6cm的直径。
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3楼2011-05-28 08:01:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-28 17:11:45
自己装的还是预装的？为什么用G100？分离的蛋白质分子量范围不一定符合。
http://www.doctorsky.cn/medical-archive/other/20080806/26978.html
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4楼2011-05-28 17:03:25
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
要是预装柱就找说明书，自己装的就计算体积，有可能走外水了。
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5楼2011-05-28 17:09:16
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zhouhou

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-28 17:09:16:
要是预装柱就找说明书，自己装的就计算体积，有可能走外水了。

如果走外水了，那我是要更换填料还是用G200呢？离子交换好点吗
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6楼2011-05-30 08:34:35
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-31 21:53:41
103KD是处于G200的分离范围的，但是分离效果不一定乐观，我的实验里，很多蛋白质分子量相差5倍都不一定分得开，但是还是你试过了才知道。

离子交换是肯定有效果的。
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7楼2011-05-30 16:06:41
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bobo20082888

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-31 21:53:48
zhouhou(金币+1): 谢谢 2011-06-01 19:31:13
zhouhou(金币+1): 好 2011-06-09 11:42:44
透析后也还有很多杂蛋白也许起保护作用，你要的蛋白稳定性怎么样，是否有失活的可能
可以跑个蛋白电泳看在你蛋白分子量处是否有带
如果要走离子柱你透析的样品之前要脱盐
常规方法的话，一步分离是很难得到纯品，一般要过两个柱子
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8楼2011-05-31 17:25:02
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FuyutingHN

禁虫
本帖内容被屏蔽
9楼2023-05-11 17:08:35
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