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zhouhou

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[求助] 关于细菌蛋白质分离纯化

细菌蛋白质分离纯化,是一种酶,经过盐析透析后酶活非常非常高,但是经过葡聚糖凝胶层析柱分离后只出现一个峰,而且收集后测酶活几乎没有。。。。。。这是怎么回事呢?目标酶是二聚体,103kd,用的是葡聚糖凝胶G-100.。。。求助各位的大侠
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

有图没有?G-100柱体积多少?
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2楼2011-05-26 20:06:56
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zhouhou

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引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-26 20:06:56:
有图没有?G-100柱体积多少?

图现在无法上传,G-100柱高是40cm高,1.6cm的直径。
3楼2011-05-28 08:01:59
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-28 17:11:45
自己装的还是预装的?为什么用G100?分离的蛋白质分子量范围不一定符合。
http://www.doctorsky.cn/medical-archive/other/20080806/26978.html
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4楼2011-05-28 17:03:25
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

要是预装柱就找说明书,自己装的就计算体积,有可能走外水了。
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5楼2011-05-28 17:09:16
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zhouhou

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引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-28 17:09:16:
要是预装柱就找说明书,自己装的就计算体积,有可能走外水了。

如果走外水了,那我是要更换填料还是用G200呢?离子交换好点吗
6楼2011-05-30 08:34:35
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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶


rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-31 21:53:41
103KD是处于G200的分离范围的,但是分离效果不一定乐观,我的实验里,很多蛋白质分子量相差5倍都不一定分得开,但是还是你试过了才知道。

离子交换是肯定有效果的。
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7楼2011-05-30 16:06:41
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bobo20082888

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-31 21:53:48
zhouhou(金币+1): 谢谢 2011-06-01 19:31:13
zhouhou(金币+1): 好 2011-06-09 11:42:44
透析后也还有很多杂蛋白也许起保护作用,你要的蛋白稳定性怎么样,是否有失活的可能
可以跑个蛋白电泳看在你蛋白分子量处是否有带
如果要走离子柱你透析的样品之前要脱盐
常规方法的话,一步分离是很难得到纯品,一般要过两个柱子
8楼2011-05-31 17:25:02
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本帖内容被屏蔽

9楼2023-05-11 17:08:35
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