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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 关于蛋白纯化的问题
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

[求助] 关于蛋白纯化的问题

最近开始做蛋白，中量已经验证可溶。
破菌离心后镍柱吸附，用咪唑洗脱后脱盐，我们实验室用的是脱盐柱，洗脱的溶液是不是用文献上相关的透析液？
文献上这个蛋白是从动物组织中通过硫酸铵分级沉淀提取的，最后的透析液为3M的硫酸铵溶液，我在想用这个溶液洗脱下来会不会有影响？
还有脱盐柱到底什么原理啊？谢谢
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在等待中涅槃重生
1楼 2011-05-06 23:51:35
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
此为预备贴
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2楼2011-05-07 01:18:39
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
rainwander(EPI+1): 2011-05-07 08:53:40
rainwander(金币+5): 和热心的虫友，鼓励 2011-05-07 08:54:30
scelab(金币+2): lz要求 2011-05-07 15:20:14
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-07 01:18:39:
此为预备贴

此为正式帖，因为直接回复时不能添加附件。
1、用脱盐柱来脱盐是最好的选择，比透析耗时短，比小脱盐柱脱盐完全。
2、洗脱的溶液不一定用文献上的，具体要看自己下一步要做什么实验，用什么溶液才不会影响那些实验。
3、文献上说的透析液不可能是3M硫酸铵，这样起不到脱盐的作用。
4、脱盐柱的原理为凝胶过滤。说明书见附件。
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3楼2011-05-07 01:26:12
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
我的蛋白和文献上的一样，只是来源不同而已，文献上有那么一句All fractionswere collected and precipitated by dialysis against 3.75*the volume of 3.6M ammonium sulfate as before
照我的理解，就是用3.6M硫酸铵溶液透析的啊
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在等待中涅槃重生
4楼2011-05-07 09:17:05
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
把文献放上来吧
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5楼2011-05-07 23:10:31
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yuxia82012

木虫 (著名写手)
其实之前我已经纯化到可溶的蛋白了，但一直测不到活性，就认为可能纯化过程中有问题，文献见附件
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在等待中涅槃重生
6楼2011-05-08 14:15:39
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ufowinner

木虫 (小有名气)
★
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-22 07:53:21
脱盐柱的原理就是凝胶过滤。 你的蛋白在高浓度硫酸铵下会盐析沉淀，活性应该也就受影响了。 脱盐的流动相你就别用硫酸铵了，换个低浓度的缓冲液。磷酸盐或者柠檬酸盐酸什么的。
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7楼2011-05-21 23:40:54
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da1234mao

铁虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-07 01:26:12:
此为正式帖，因为直接回复时不能添加附件。
1、用脱盐柱来脱盐是最好的选择，比透析耗时短，比小脱盐柱脱盐完全。
2、洗脱的溶液不一定用文献上的，具体要看自己下一步要做什么实验，用什么溶液才不会影响那些 ...

学习了
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8楼2012-01-01 00:37:20
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