| 查看: 1760 | 回复: 10 | |||
[交流]
【求助/交流】有关蛋白纯化及其基因克隆的问题！请大家帮助！ 已有6人参与
|
|||
|
请各位高手多多帮忙啊！我的问题比较多，现在实验卡住很难过啊！ 我现在的实验目标是从细菌发酵液中分离纯化一种活性蛋白并克隆其基因。目前我过了DEAE Sepharse FF和G100，收集目标洗脱峰，做了SDS-PAGE，但结果是两个条带，其分子量也是比较接近的，分子量差距大约为5kD。因为不知道目标蛋白是何种蛋白质，所以我把这两个条带分别作了肽指纹图谱（PMF）鉴定，但鉴定结果的得分并不高，只有74分和75分，而且鉴定结果分别是离子通道蛋白和假定蛋白（推测其具有某种催化活性）。我想请教大家，如果以我现在的实验结果，继续克隆MAIDI-TOF鉴定出的基因并表达，再通过表达出的蛋白质做活性鉴定，是否具有足够的说服力呢？（这样做下去做不出结果的风险是否比较大？）如果不具有足够的说服力，是否需要进一步的分离纯化？可否推荐进一步分离纯化的方法？（比如柱料选择，洗脱条件，或者更新的分离纯化手段等）或者能否提供另一种思路做下去这个实验呢？ 希望各位高手多多指教，菜鸟的我再次先谢过各位了！！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有74人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有8人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 真菌的基因克隆与表达 为什么要去除内含子？
已经有5人回复
- 基因克隆中酶切连接问题
已经有13人回复
- 一个关于水稻基因图位克隆的问题诚挚恳求大牛解答
已经有35人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 【求助/交流】有做过单克隆抗体纯化的大侠帮忙给看一下
已经有5人回复
- 【求助/交流】关于基因克隆写文章的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】基因克隆前PCR产物都要纯化吗？
已经有15人回复
- 【求助/交流】目的基因克隆总不成功
已经有5人回复
- 【求助/交流】克隆，纯化，酶学性质研究的sci文章创新性在哪里啊
已经有16人回复
- 【求助/交流】求助基因克隆方面的问题解决方案
已经有17人回复
- 克隆基因全长引物设计问题
已经有32人回复
- 基因带六个his标签，蛋白纯化时为何挂不上镍柱
已经有26人回复
7楼2010-06-10 10:28:17
duanyongzhong
银虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 473.4
- 红花: 1
- 帖子: 533
- 在线: 133.7小时
- 虫号: 453251
- 注册: 2007-11-06
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
2楼2010-06-09 22:19:39
3楼2010-06-09 22:40:47
scelab
荣誉版主 (文坛精英)
小木虫之有关部门负责人
- 应助: 63 (初中生)
- 贵宾: 1.475
- 金币: 8294.6
- 散金: 4158
- 红花: 39
- 沙发: 99
- 帖子: 21277
- 在线: 3169.3小时
- 虫号: 482065
- 注册: 2007-12-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
4楼2010-06-09 23:20:54
007xutao
木虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 5003.3
- 帖子: 1460
- 在线: 103.8小时
- 虫号: 419526
- 注册: 2007-07-06
- 性别: GG
- 专业: 植物资源学
5楼2010-06-10 07:19:39
6楼2010-06-10 09:55:22
8楼2010-06-10 10:36:25
wordsworth3180
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3624.4
- 帖子: 703
- 在线: 337.8小时
- 虫号: 568607
- 注册: 2008-06-03
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2010-06-10 14:17:43
10楼2010-06-10 19:57:45
