24小时热门版块排行榜    

查看: 1361  |  回复: 5

chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化问题! 已有3人参与

大家帮忙分析一下吧
我用很久以前保的菌纯化蛋白,发现蛋白量相对以前减少了(我的蛋白是GST标签的),而且纯化出来GST的量大概是蛋白的两倍,比以前增多约三四倍,所以我重新提取质粒,重新做了一次转化,但是纯化出来的蛋白还是跟以前一样,没有改善。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoenwen

金虫 (小有名气)

可能发生变异了。
2楼2010-10-27 13:46:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
1949stone(金币+2):有见地 2010-10-27 13:55:17
呵呵,这个问题很常见的,不同克隆之间都是有差异的,有的克隆表达量高,有的克隆虽然也表达,但是量可能就少很多。我们一般都是经过两轮克隆筛选的,然后保存表达高的克隆进行冻存,这样将来你的表达量既高且很稳定。

祝好运
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-10-27 13:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-10-27 13:51:49:
呵呵,这个问题很常见的,不同克隆之间都是有差异的,有的克隆表达量高,有的克隆虽然也表达,但是量可能就少很多。我们一般都是经过两轮克隆筛选的,然后保存表达高的克隆进行冻存,这样将来你的表达量既高且很稳 ...

“两轮克隆筛选”是指转化两次吗?能具体说说吗?谢谢你!
4楼2010-10-27 20:56:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-10-27 20:56:01:

“两轮克隆筛选”是指转化两次吗?能具体说说吗?谢谢你!

不是的,呵呵,我给你提供一篇文献你看看,里面有 double selection for high-level expression,发表在 protein science 上的,practical protocols for production of very。。。

链接如下:
http://www.proteinscience.org/de ... ant_proteins_u.html
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2010-10-28 09:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-10-28 09:11:15:



不是的,呵呵,我给你提供一篇文献你看看,里面有 double selection for high-level expression,发表在 protein science 上的,practical protocols for production of very。。。

链接如下:
[url]ht ...

谢谢你!!
6楼2010-10-28 15:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chunmeiyang 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +4 zhaosm1982 2026-08-27 5/250 2026-08-27 12:17 by zhaosm1982
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +5 Kittylucky 2026-08-27 5/250 2026-08-27 12:10 by 姜太公烤鱼
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +5 苏东坡二世 2026-08-23 5/250 2026-08-27 10:39 by 炜雨
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 17/850 2026-08-27 08:20 by 大萍1987
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 +7 晴天加油 2026-08-26 8/400 2026-08-27 07:53 by longfie172
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +22 羊腰板 2026-08-21 25/1250 2026-08-26 15:00 by zuocuiping
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
信息提示
请填处理意见