| 查看: 2164 | 回复: 7 | |||
[交流]
【求助/交流】关于硫酸铵沉淀的问题 已有7人参与
|
| 我在做酶纯化，先把发酵液硫酸铵分级沉淀，结果每一级都有活性，也有蛋白，比活都差不多，一点都没分开。于是我又把分级的沉淀合并过超滤膜，先过的十万的膜，结果蛋白都在十万以上，十万以下几乎什么都没有。我觉得这个结果有问题，怎么可能两种方法都一点效果都没有。而且发酵液里怎么会没有十万以下的蛋白呢？这到底是为什么呢？亲们，谁能告诉我呀，或者有谁有过同样的情况啊！ |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有3人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有81人回复
-
售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急
已经有7人回复
-
感觉是下周放榜了
已经有7人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有4人回复
-
哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？
已经有15人回复
-
filecode=后面第一个是大写字母
已经有9人回复
-
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 硫酸铵沉淀脂肪酶的问题
已经有5人回复
- 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题
已经有12人回复
- 硫酸铵沉淀蛋白质
已经有16人回复
- 硫酸铵沉淀后透析，里面的沉淀是什么？
已经有6人回复
- 关于蛋白纯化的问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】急求关于硫酸铵沉淀
已经有3人回复
- 【求助/交流】又硫酸铵沉淀问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白
已经有12人回复
- 【求助/交流】请问哪位懂硫铵沉淀，给点经验！
已经有6人回复
- 【求助/交流】蛋白质盐析及除盐
已经有14人回复
- 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白
已经有6人回复
- 【求助/交流】硫酸铵分级沉淀
已经有13人回复
2楼2010-07-06 10:25:32
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很详细，感谢交流~~ 2010-07-09 17:06:32
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很详细，感谢交流~~ 2010-07-09 17:06:32
|
先说硫酸铵沉淀 你可以先做个小试：将样品分成五等分，每等份分别加入20%、30%40%、50%、60%的硫酸铵。取上清去沉淀，然后再分别往上清中加入硫酸铵至：30%、40%、50%、60%、70%。取沉淀再溶解测活性。这样就能大致清楚你所需要蛋白的沉淀浓度了。 关于超滤也有很多实际问题。超滤膜给出的分子量数值只是一个大致的范围，它不可能分的很准确，一般要选择比目标蛋白大2-3倍左右的膜来分离。比如你所需要分离的蛋白分子量有5万，那么你就要选择10万-15万的膜。 楼主所说的将分级沉淀合并过10万膜，很有可能过下去的分子量都在5万以下，甚至更低，结合你自己的实验条件，你的发酵液里小分子量蛋白可能比较少。 |
3楼2010-07-09 16:06:38
刘小乐
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 53.3
- 散金: 11
- 帖子: 67
- 在线: 10.8小时
- 虫号: 943403
- 注册: 2010-01-16
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
4楼2010-07-12 12:53:39
5楼2010-07-12 15:29:20
6楼2010-07-12 16:09:36
7楼2010-07-17 13:52:07
chaoen
木虫 (正式写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1845.3
- 散金: 22
- 帖子: 719
- 在线: 108小时
- 虫号: 257390
- 注册: 2006-06-04
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2011-01-13 22:04:03
25