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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白
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kong10

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白 已有9人参与

提取酶时，采用硫酸铵沉淀，然后离心，但买看到蛋白，请问是哪里出现问题，离心速度一般要多大，还有整个沉淀操作过程中需要注意什么，样品量少，缓冲液也就几ml，非常感谢！
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1楼 2011-01-12 22:58:32
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
加了多少硫酸铵呢？
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-12 23:54:41
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kong10

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-12 23:54:41:
加了多少硫酸铵呢？

80%饱和度，我从叶片提取，叶绿素含量太大，都不知道蛋白在哪，溶液不会变澄清吗？就是上清
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3楼2011-01-13 18:08:37
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chaoen

木虫 (正式写手)
★ ★
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rainwander(金币+1):欢迎参与讨论~~~ 2011-01-13 20:12:08
最近我也在做硫酸铵沉淀，大家一起讨论讨论
当加到80%的SAS应该很容易看到有悬浮物了吧，是不是可以直接视觉角度可以判断的啊？
如果是测定蛋白觉得没有的话，说明蛋白检测方法和叶绿素有干扰吧
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4楼2011-01-13 19:44:17
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chaoen

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+3):good 2011-01-15 10:23:49
我本人在做分级沉淀，前天做的是两步法：40% 和60%，但是检测酶活力的时候，发现大部分都是污染酶的酶活力。可能说明这个污染酶和我要的酶在这个浓度范围可能没法分开。
现在我正在做20%-70%，5%一个范围，看看是否能够将这两个酶分开，大家觉得这样做合理吗？
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5楼2011-01-13 19:48:54
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cnlics

木虫 (小有名气)
★
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硫酸铵分级沉淀只是预处理手段。
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6楼2011-01-13 20:32:48
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kong10

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by chaoen at 2011-01-13 19:44:17:
最近我也在做硫酸铵沉淀，大家一起讨论讨论
当加到80%的SAS应该很容易看到有悬浮物了吧，是不是可以直接视觉角度可以判断的啊？
如果是测定蛋白觉得没有的话，说明蛋白检测方法和叶绿素有干扰吧

蛋白在悬浮物里？那一般叶绿素干扰怎么排除？
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7楼2011-01-13 21:21:56
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xyshark

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhd997(金币+5):鼓励新虫交流 2011-01-15 10:24:05
叶绿素难道会和蛋白质结合，使蛋白质不析出，80%的硫酸铵应该很容易出蛋白质的，我以前做的是真菌酶的分离，80%的硫酸铵很给力的。
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8楼2011-01-14 11:04:30
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simiao8793

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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dhd997(金币+2):谢谢交流 2011-01-15 10:24:28
我之前做过硫酸铵分级沉淀蛋白，也是80％，在4℃过夜沉淀，离心转速10000rpm,5min，效果很好
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独孤圣仙！
9楼2011-01-14 12:36:19
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chaoen

木虫 (正式写手)

又硫酸铵沉淀问题

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本人最近在做蛋白质的沉淀，同时用目的纯化酶和粗酶液做的。
发现纯化酶在沉淀时，活力大部分在30%-40%中，部分存在在40%-50%中。我想请问大家那是不是意味着我用粗酶液做的话，目的酶也应该大部分在30-40%中呢？因为酶活测定粗酶液时，有其他污染酶干扰。没法测出可靠的酶活。
谢谢！
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10楼2011-01-15 05:54:25
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