应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 【求助/交流】盐析法
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
61/1返回列表
查看: 1667  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

543608268

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】盐析法 已有1人参与

请求盐析法沉淀蛋白质 配方 比如硫酸铵 等

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 08:08 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-23 11:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henkally

禁虫 (著名写手)
★ ★
看天(金币+1):鼓励 2010-08-23 12:52:53
看天(金币+1):鼓励 2010-08-23 12:53:15
看天:打不开 2010-08-23 12:53:16
本帖内容被屏蔽
2楼2010-08-23 11:23:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

543608268

金虫 (正式写手)
打不开啊  兄弟
回复此楼
3楼2010-08-23 12:10:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

henkally

禁虫 (著名写手)
543608268(金币+2): 2010-08-26 18:22:21
本帖内容被屏蔽
4楼2010-08-23 13:46:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaojc

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-25 09:49:23
硫酸铵沉淀法
基本原理
硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。盐浓度通常用饱和度来表示。硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广。
试剂及仪器
• 组织培养上清液、血清样品或腹水等
• 硫酸铵（NH4）SO4      
• 饱和硫酸铵溶液（SAS）
• 蒸馏水
• PBS
• 透析袋
• 超速离心机
• pH计
• 磁力搅拌器
实验步骤
以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33%—50%。
一、配制饱和硫酸铵溶液（SAS）
将767g（NH4）2SO4 边搅拌边慢慢加到1升蒸馏水中。用氨水或硫酸调到pH7.0。此即饱和度为100%的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25C）；
二、沉淀
1、样品（如腹水）20 000g  离心30 min，除去细胞碎片；
2、保留上清液并测量体积；
3、边搅拌边慢慢加入等体积的SAS到上清液中，终浓度为1：1（v/v）；
4、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时或搅拌过夜（4C），使蛋白质充分沉淀。
三、透析
1、蛋白质溶液10 000g  离心30 min（4C）。弃上清保留沉淀；
2、将沉淀溶于少量（10-20ml）PBS中。沉淀溶解后放入透析袋对PBS透析24-48小时（4C），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸铵；
3、透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。
应用提示
一、先用较低浓度的硫酸氨预沉淀，除去样品中的杂蛋白。
1、边搅拌边慢慢加SAS到样品溶液中，使浓度为0.5:1 (v/v)；
2、将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6小时 或过夜（4C）；
3、3000g  离心30 min（4C），保留上清液；
4、上清液再加SAS到0.5:1 (v/v)，再次离心得到沉淀。将沉淀溶于PBS，同前透析，除去硫酸氨；
5、杂蛋白与欲纯化蛋白在硫酸氨溶液中溶解度差别很大时，用预沉淀除杂蛋白是非常有效的；
二、为避免体积过大，可用固体硫酸氨进行盐析（硫酸氨用量参考表1）；
三、硫酸氨沉淀法与层析技术结合使用，可得到更进一步纯化的抗体。
赞一下(2人) 回复此楼
专注、专心、专业
5楼2010-08-25 09:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天马0825

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yaojc at 2010-08-25 09:14:43
硫酸铵沉淀法
基本原理
硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球蛋白从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子 ...

好啊
回复此楼
自信加努力成就人生
6楼2014-02-17 22:42:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 海阔天空遨游 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料考研求调剂总分280 +13 mkjlz1 2026-04-06 15/750 2026-04-07 07:33 by zhyzzh
[考研] 0703化学 +20 妮妮ninicgb 2026-04-04 23/1150 2026-04-06 23:06 by chenzhimin
[考研] 285求调剂 +12 哦呦呼o 2026-04-04 12/600 2026-04-06 23:04 by chenzhimin
[考研] 338求调剂 +4 我想上岸ii 2026-04-05 4/200 2026-04-06 21:04 by 木子君1218
[考研] 269电子信息求调剂，可转专业 +5 独酌wl 2026-04-06 5/250 2026-04-06 17:23 by 土木硕士招生
[考研] 270分求调剂 +5 maxjxbsk 2026-04-01 5/250 2026-04-06 15:32 by lin-da
[考研] 319分085702安全工程求调剂 +4 rious 2026-04-05 4/200 2026-04-06 11:08 by 静静静静静静静�
[考研] 化学调剂求助 +8 LULONG1 2026-04-03 8/400 2026-04-06 10:26 by dongzh2009
[考研] 319求调剂 +3 handrui 2026-04-05 3/150 2026-04-06 09:33 by jp9609
[考研] 计算机11408，286分求调剂 +7 木子念晞 2026-04-05 7/350 2026-04-05 19:02 by chy09050039
[考研] 326求调剂 +3 顾若浮生 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:32 by 蓝云思雨
[考研] 284求调剂 +7 徐同学_001 2026-04-04 13/650 2026-04-05 17:19 by yulian1987
[考研] 275求调剂 +16 waltzh 2026-04-01 16/800 2026-04-05 17:14 by Hdyxbekcb
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 化工调剂303分，过四级 +28 栖梧待风 2026-04-02 28/1400 2026-04-03 21:40 by qlm5820
[考研] 286求调剂 +8 lim0922 2026-04-02 8/400 2026-04-03 20:19 by rzh123456
[考研] 环境工程297分求调剂一志愿杭高院 +15 GENJIOW 2026-03-31 16/800 2026-04-02 17:56 by cyh—315
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
[考研] 0710生物学，325求调剂 +3 mkkkkkl 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:48 by Jaylen.
[考研] 求调剂0703 +5 周嘉尧 2026-03-31 8/400 2026-04-01 20:32 by ltltkkk
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭