24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2069  |  回复: 11

farther1990

铜虫 (初入文坛)

[求助] 沉淀蛋白的方法? 已有4人参与

我使用荧光配体和受体结合,受体溶解在去污剂中,现在想通过沉淀蛋白,测定游离配体浓度。各位虫友有没有相关经验,求指教!用什么物质来沉淀这个蛋白,还保持蛋白的活性。有相关文献的推荐也行哦~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

不以物喜,不以己悲
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

...
    我能想到的只有硝酸铵........................................
Let God do with it as He wills
2楼2014-02-24 17:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

farther1990

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-24 17:18:27
...
    我能想到的只有硝酸铵........................................

谢谢哦~
不以物喜,不以己悲
3楼2014-02-24 19:44:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2014-02-24 21:12:32
硫酸铵也可以吧,我们析出蛋白都用它。
hehe
4楼2014-02-24 20:55:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lingbi

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:38
TCA 呢,好像能沉淀蛋白。觉得最好用超滤管浓缩一下,这样防止沉淀时影响活性。
5楼2014-02-24 21:38:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:44
硫酸铵是能保证蛋白活性的沉淀初步纯化方法,TCA、丙酮沉淀都会使蛋白变性,还有等电点沉淀、乙醇沉淀,低温加保护剂超滤也能分离并保持活性。
6楼2014-02-24 21:55:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:50
1、硫酸铵沉淀,抗体浓缩就用这个方法
2、分子筛离心柱过滤浓缩蛋白质
7楼2014-02-25 10:24:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

farther1990

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 10:24:20
1、硫酸铵沉淀,抗体浓缩就用这个方法
2、分子筛离心柱过滤浓缩蛋白质

主要是想通过沉淀,最后离心,得到最后得到滤液。因为样品量极少,就100ul0.1mg蛋白,我怕普通方法无法完全使蛋白沉淀。尝试使用过30%PEG6000,并没有看到有沉淀形成。很是苦恼啊,我想问下是不是因为我是膜蛋白,里面用去污剂溶解了,所以导致不能沉淀啊?
不以物喜,不以己悲
8楼2014-02-25 14:30:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:56
引用回帖:
8楼: Originally posted by farther1990 at 2014-02-25 14:30:27
主要是想通过沉淀,最后离心,得到最后得到滤液。因为样品量极少,就100ul0.1mg蛋白,我怕普通方法无法完全使蛋白沉淀。尝试使用过30%PEG6000,并没有看到有沉淀形成。很是苦恼啊,我想问下是不是因为我是膜蛋白,里 ...

1 mg/ml的浓度已经不低了,有些去污剂能使蛋白质变性(比如SDS)。
如果不考虑蛋白变性,很容易沉淀。
其它的不知道。
9楼2014-02-25 15:31:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

farther1990

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 15:31:48
1 mg/ml的浓度已经不低了,有些去污剂能使蛋白质变性(比如SDS)。
如果不考虑蛋白变性,很容易沉淀。
其它的不知道。...

就是想保持不变性,然后又能充分沉淀哦
不以物喜,不以己悲
10楼2014-02-25 18:07:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 farther1990 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +7 梁富贵险中求 2026-04-04 7/350 2026-04-05 11:11 by imissbao
[考研] 考研调剂 +3 mcbbc 2026-04-04 3/150 2026-04-05 10:03 by barlinike
[考研] 本科211 分数293请求调剂 +4 莲菜就是藕吧 2026-04-01 4/200 2026-04-04 22:32 by hemengdong
[考研] 材料调剂 +15 一样YWY 2026-04-01 15/750 2026-04-04 22:23 by hemengdong
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-04-04 4/200 2026-04-04 22:12 by 啵啵啵0119
[考研] 294求调剂 +6 Grey_Ey 2026-04-02 9/450 2026-04-04 22:07 by hemengdong
[考研] 调剂 +4 是可乐不是可乐 2026-04-04 4/200 2026-04-04 19:41 by 唐沐儿
[考研] 357求调剂 +13 1050389037 2026-04-03 13/650 2026-04-03 22:27 by 无际的草原
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +7 困困困困坤坤 2026-04-02 7/350 2026-04-03 17:26 by Yuena_Wang
[考研] 考研调剂 +8 不爱喝饮料 2026-04-03 8/400 2026-04-03 16:40 by Mistake-J
[考研] 材料专硕322分 +13 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-01 13/650 2026-04-03 16:08 by 哦哦123
[基金申请] esi高被引论文是不是能对中标有所加分和帮助呢 +5 redcom 2026-04-01 6/300 2026-04-03 15:15 by Howard28
[考研] 085600专硕材料与化工348分求调剂 +10 上学啦! 2026-04-01 11/550 2026-04-03 14:13 by 百灵童888
[考研] 085501一志愿天工大,机械专硕求调剂,跨材料 +3 33上 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:08 by 1753564080
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-03 4/200 2026-04-03 13:28 by jiouuu
[考研] 313求调剂 +3 ~微微凉~ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 290求调剂 +5 dfffsar 2026-03-29 5/250 2026-04-01 19:45 by 6781022
[考研] 085601 329分调剂 +6 yzsa12 2026-03-31 6/300 2026-03-31 15:23 by yanflower7133
[考研] 求调剂 +10 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 10/500 2026-03-30 18:34 by 544594351
信息提示
请填处理意见