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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 沉淀蛋白的方法？
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farther1990

铜虫 (初入文坛)

[求助] 沉淀蛋白的方法？ 已有4人参与

我使用荧光配体和受体结合，受体溶解在去污剂中，现在想通过沉淀蛋白，测定游离配体浓度。各位虫友有没有相关经验，求指教！用什么物质来沉淀这个蛋白，还保持蛋白的活性。有相关文献的推荐也行哦~
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不以物喜，不以己悲
1楼 2014-02-24 16:55:10
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
...
    我能想到的只有硝酸铵........................................
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Let God do with it as He wills
2楼2014-02-24 17:18:27
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-02-24 17:18:27
...
    我能想到的只有硝酸铵........................................

谢谢哦~
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不以物喜，不以己悲
3楼2014-02-24 19:44:00
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-02-24 21:12:32
硫酸铵也可以吧，我们析出蛋白都用它。
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hehe
4楼2014-02-24 20:55:40
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lingbi

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:38
TCA 呢，好像能沉淀蛋白。觉得最好用超滤管浓缩一下，这样防止沉淀时影响活性。
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5楼2014-02-24 21:38:51
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chengjg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:44
硫酸铵是能保证蛋白活性的沉淀初步纯化方法，TCA、丙酮沉淀都会使蛋白变性，还有等电点沉淀、乙醇沉淀，低温加保护剂超滤也能分离并保持活性。
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6楼2014-02-24 21:55:07
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:50
1、硫酸铵沉淀，抗体浓缩就用这个方法
2、分子筛离心柱过滤浓缩蛋白质
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7楼2014-02-25 10:24:20
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 10:24:20
1、硫酸铵沉淀，抗体浓缩就用这个方法
2、分子筛离心柱过滤浓缩蛋白质

主要是想通过沉淀，最后离心，得到最后得到滤液。因为样品量极少，就100ul0.1mg蛋白，我怕普通方法无法完全使蛋白沉淀。尝试使用过30%PEG6000,并没有看到有沉淀形成。很是苦恼啊，我想问下是不是因为我是膜蛋白，里面用去污剂溶解了，所以导致不能沉淀啊？
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不以物喜，不以己悲
8楼2014-02-25 14:30:27
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-02-26 08:23:56
引用回帖:
8楼: Originally posted by farther1990 at 2014-02-25 14:30:27
主要是想通过沉淀，最后离心，得到最后得到滤液。因为样品量极少，就100ul0.1mg蛋白，我怕普通方法无法完全使蛋白沉淀。尝试使用过30%PEG6000,并没有看到有沉淀形成。很是苦恼啊，我想问下是不是因为我是膜蛋白，里 ...

1 mg/ml的浓度已经不低了，有些去污剂能使蛋白质变性（比如SDS）。
如果不考虑蛋白变性，很容易沉淀。
其它的不知道。
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9楼2014-02-25 15:31:48
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farther1990

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-02-25 15:31:48
1 mg/ml的浓度已经不低了，有些去污剂能使蛋白质变性（比如SDS）。
如果不考虑蛋白变性，很容易沉淀。
其它的不知道。...

就是想保持不变性，然后又能充分沉淀哦
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不以物喜，不以己悲
10楼2014-02-25 18:07:18
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