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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白保存 冻融后沉淀
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nsfzlc

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白保存 冻融后沉淀

我的蛋白在经过Ni柱纯化后，超滤浓缩后，直接放在-20保存，后来再取出过分子筛时，放在冰上，或者室温解冻，都会有不少沉淀析出？是蛋白变性了吧？该怎么避免呢？总不能每次纯化都不睡觉连续作业吧。。。
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1楼 2013-01-21 14:36:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

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液氮冻后放-80°C应该问题不大了。
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蓝精灵
4楼2013-01-22 08:22:19
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普通回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果只是过夜的话放在4°C。长时间液氮冻后放-80°C。你的样品里加了甘油吗？
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2楼2013-01-21 15:55:26
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匿名

用户注销 (正式写手)
★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-01-22 12:04:59
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3楼2013-01-22 05:46:32
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.你蛋白在Ni柱纯化，其含有一定浓度的咪唑，对蛋白有影响，建议纯化后直接进行除盐，保存蛋白。
2.对于你的蛋白样品最好进行稳定性研究，冻融后出现沉淀可能和你样品的稳定性有关。
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5楼2013-01-22 09:55:26
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Rachel1129

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
也有可能是你在纯化蛋白的过程中没有严格在冰上操作或者纯化时间过长，导致蛋白变性。
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6楼2013-01-22 10:33:47
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runying36

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是没复性好或者是变性蛋白。上柱前离心去除，不能让堵柱子
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7楼2013-01-22 11:04:55
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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什么蛋白？我们一般做蛋白时，都不冰冻！在冷冻条件下下，蛋白的周边固定结合水会变，再化冬后会引起引起蛋白沉淀！！！如果短时间，你可以放4C保存。时间长了，可以试试冻干，不过冻干后，有些蛋白的溶解性会降低。具体的看你的蛋白而定。
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shine
8楼2013-01-22 15:39:40
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30937747

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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我的好像也是诶，析出来以后就溶不掉了。
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我依旧会努力.
9楼2013-01-24 09:38:48
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

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这种情况我遇到过，超滤浓缩不知道你顺便置换Buffer了没有，不置换Buffer,浓缩后样品浓度变大咪唑对蛋白的影响应该更大。还有一种情况就是你的蛋白在浓缩后的缓冲液中不稳定，尝试改变缓冲液的PH值，沉淀现象可能消失。我遇到的情况一开始和你说的一样，有时洗脱下来后都有分层，后来将洗脱液的PH调到8后-20保存，解冻后基本上就没什么沉淀了。
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10楼2013-01-24 11:01:34
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