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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白原液超滤浓缩后发生沉淀
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闭目神童

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白原液超滤浓缩后发生沉淀

我的蛋白原液缓冲体系为20mm/l PBS 50mm/l NaCl,pH7.0（我的蛋白等电点为7.35—8.65）,浓缩前蛋白浓度为2mg/ml，超滤浓缩后的蛋白浓度为20mg/ml。将浓缩后的原液放5都冷藏储存，第二天却发现底部有一层悬浮白色的沉淀。是否为蛋白的沉淀啊？怎么解决？各位大侠
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天道酬勤
1楼 2012-11-02 16:44:27
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hailanshi

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢分享经验 2012-11-03 09:16:40
我以前也遇到过这种情况，你试试提高盐浓度。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

闭目神童
2楼2012-11-02 22:58:46
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢详细的回答 2012-11-03 09:16:28
个人感觉：
1. 首先需确认是否发生了沉淀，如果储存前有进行分装，那么可取少量解冻观察一下，有时不一定是沉淀而是高浓度蛋白结冻时的正常现象；
2. 浓度20mg/mL是蛮高的了，是否需要呢？有些蛋白高浓度也是容易发生沉淀的原因之一；
3. 将蛋白冻存时，可以使用“干冰+酒精”浴加速，使样品快速结冻。因为如果结冻的速度较慢，溶液中得水分可能会较先结冻而使用蛋白的局部浓度升高超过阈值而沉淀；
4. 浓缩后的蛋白需要混合均匀，也是防止局部浓度较高；
5. 对蛋白的性质需要了解一下，可能需要添加一下保护剂，或者改变存储条件比如盐浓度等。若是对蛋白的性质不熟悉，可以参考一下别人用的storage buffer，必要时需要进行测试。

希望对你有帮助。
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小兵一个
3楼2012-11-03 09:00:46
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dy_414

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是蛋白的沉淀。
20mg/ml，如果没有保护剂的话浓度太高了，可以加10%-50%的甘油试试，或者如果冻融对蛋白活性影响不大的话，直接扔低温保存
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我坚信，rp是攒出来的
4楼2012-11-03 11:42:36
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闭目神童

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linxt2005 at 2012-11-03 09:00:46
个人感觉：
1. 首先需确认是否发生了沉淀，如果储存前有进行分装，那么可取少量解冻观察一下，有时不一定是沉淀而是高浓度蛋白结冻时的正常现象；
2. 浓度20mg/mL是蛮高的了，是否需要呢？有些蛋白高浓度也是容易 ...

我需要做冻干制剂上临床，所以原液希望尽可能的高浓度。我再分析一下，谢了！
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天道酬勤
5楼2012-11-05 15:06:59
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闭目神童

铜虫 (初入文坛)
感谢各位的指导！
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天道酬勤
6楼2012-11-05 15:10:20
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闭目神童

铜虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by hailanshi at 2012-11-02 22:58:46
我以前也遇到过这种情况，你试试提高盐浓度。

我把盐浓度提高到100mm和150mm，先观察一段时间。
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天道酬勤
7楼2012-11-05 15:12:39
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dongniaoxin

铁杆木虫 (正式写手)

响当当的木头

【答案】应助回帖

你要做冻干制剂就尽快做才行，这样高的蛋白浓度反复冻融就是会有类似蛋白聚合物的沉淀出现。所以最好还是在4℃放着
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没有梦就走，没有错就不向谁低头
8楼2012-11-07 08:47:40
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闭目神童

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hailanshi at 2012-11-02 22:58:46
我以前也遇到过这种情况，你试试提高盐浓度。

正在尝试。。。不知你处理的怎么样？
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天道酬勤
9楼2012-11-08 21:08:33
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闭目神童

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linxt2005 at 2012-11-03 09:00:46
个人感觉：
1. 首先需确认是否发生了沉淀，如果储存前有进行分装，那么可取少量解冻观察一下，有时不一定是沉淀而是高浓度蛋白结冻时的正常现象；
2. 浓度20mg/mL是蛮高的了，是否需要呢？有些蛋白高浓度也是容易 ...

谢了！现在正在分析和排除原因。
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天道酬勤
10楼2012-11-08 21:09:32
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