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蛋白原液超滤浓缩后发生沉淀
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| 我的蛋白原液缓冲体系为20mm/l PBS 50mm/l NaCl,pH7.0（我的蛋白等电点为7.35—8.65）,浓缩前蛋白浓度为2mg/ml，超滤浓缩后的蛋白浓度为20mg/ml。将浓缩后的原液放5都冷藏储存，第二天却发现底部有一层悬浮白色的沉淀。是否为蛋白的沉淀啊？怎么解决？各位大侠 |
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linxt2005
金虫 (小有名气)
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢详细的回答 2012-11-03 09:16:28
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢详细的回答 2012-11-03 09:16:28
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个人感觉： 1. 首先需确认是否发生了沉淀，如果储存前有进行分装，那么可取少量解冻观察一下，有时不一定是沉淀而是高浓度蛋白结冻时的正常现象； 2. 浓度20mg/mL是蛮高的了，是否需要呢？有些蛋白高浓度也是容易发生沉淀的原因之一； 3. 将蛋白冻存时，可以使用“干冰+酒精”浴加速，使样品快速结冻。因为如果结冻的速度较慢，溶液中得水分可能会较先结冻而使用蛋白的局部浓度升高超过阈值而沉淀； 4. 浓缩后的蛋白需要混合均匀，也是防止局部浓度较高； 5. 对蛋白的性质需要了解一下，可能需要添加一下保护剂，或者改变存储条件比如盐浓度等。若是对蛋白的性质不熟悉，可以参考一下别人用的storage buffer，必要时需要进行测试。 希望对你有帮助。 |
3楼2012-11-03 09:00:46
dy_414
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4楼2012-11-03 11:42:36