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1289622

木虫 (正式写手)

[求助] 血浆蛋白沉淀问题

血样品处理过程,蛋白沉淀与药物提取如何操作,是先沉淀蛋白还是提取药物?若用乙腈沉淀蛋白,乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取药物该怎样操作?乙腈-乙酸乙酯(30:70)会溶解蛋白吧?!
   乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取药物离心后,上清液要全部取完吗,比如离心后上清液6ml,只取5ml,每次平行操作这样可以吗?

[ Last edited by 1289622 on 2011-9-1 at 17:25 ]
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破土草儿

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 苑子 at 2011-09-28 13:48:30:
你好,请教一下“可以不必全部吸取上清液”怎么解释呢,如果血浆中药物含量就少,如果不全部取完不是测不出吗?

你说,你去0.2ml,和取1ml,吹干同体积复溶,也就相差5倍,一个数量级都没有!所以不用担心检测不到,如果检测不到,就说明你的量本来就很少,达不到S/N大于3的要求。
8楼2011-09-28 14:12:42
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破土草儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by 1289622 at 2011-09-01 17:11:11:
血样品处理过程,蛋白沉淀与药物提取如何操作,是先沉淀蛋白还是提取药物?若用乙腈沉淀蛋白,乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取药物该怎样操作?乙腈-乙酸乙酯(30:70)会溶解蛋白吧?!
   乙腈-乙酸乙酯(30:70)提取 ...

一般先用有机溶剂或者盐沉淀蛋白,再萃取药物。具体做法,往血浆(血清)中添加纯有机溶剂(或者一定浓度的盐,如乙腈)同时添加一些酸(或者碱,为了增加药物在有机相中的溶解率),涡旋离心,再添加萃取剂(如乙酸乙酯,或者转移上清液后,添加萃取剂萃取涡旋离心,可以不必全部吸取上清液,只要记住吸取溶液的体积和开始蛋白沉淀时溶剂的体积就行),之后吸取部分上清液,直接进样或者复溶进样。
2楼2011-09-02 22:53:28
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1289622

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 破土草儿 at 2011-09-02 22:53:28:
一般先用有机溶剂或者盐沉淀蛋白,再萃取药物。具体做法,往血浆(血清)中添加纯有机溶剂(或者一定浓度的盐,如乙腈)同时添加一些酸(或者碱,为了增加药物在有机相中的溶解率),涡旋离心,再添加萃取剂(如乙 ...

大侠,蛋白沉淀和药物提取这个过程我还不是太明白,能不能说的具体点,举个例子吧。

还有个问题要请教,静脉给药后,第一个采药点的时间怎样定?有的时给药后2min,有的5min、10min,怎样确定呢?有什么依据?一般是多长时间?
3楼2011-09-04 20:33:49
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破土草儿

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

1289622(金币+2, 博学EPI+1): 2011-09-05 17:52:47
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3楼: Originally posted by 1289622 at 2011-09-04 20:33:49:
大侠,蛋白沉淀和药物提取这个过程我还不是太明白,能不能说的具体点,举个例子吧。

还有个问题要请教,静脉给药后,第一个采药点的时间怎样定?有的时给药后2min,有的5min、10min,怎样确定呢?有什么依据? ...

你好,我也不是什么大侠,都是同辈。蛋白沉淀就是把血浆(或者血清)里头的蛋白沉淀下来,方法就是加有机溶剂使蛋白沉淀,“有些情况下”,上清液可以直接上液相(需过滤膜,当然高速离心如一万二可以不过膜,或者吸取上清液干燥复溶,复溶的目的1、萃取,2、增加浓度)。液液萃取就是涡旋离心,使一部分血液内源性物质不萃取,而目标化合物可以萃取在有机相中,原理为有机相是蛋白质变性沉淀,同时根据相似相容原理萃取目标分析物,直接吸取萃取部分上样或者复溶。记住,请回头看,我打引号的有些情况下部分,对于一些物质,直接用蛋白沉淀,内源性杂志很多,导致“基质效应”太大,而单独用液液萃取,可能回收率太低,所以在一些文章中,将液液萃取和蛋白沉淀两者结合起来用。这个我想我说明白了,还不明白自己找一篇中文或者英文的相关文献,看样品制备部分就能够理解我所说的意思了。
对于你第二个问题,你看过药时曲线(血药浓度-时间),只要保证有先上升后下降形状就行,当然由于有些药物分布太快,只能看到下降的部分,那你就尽量早取血,不必拘泥于2min或者5min之类,只要能够保证有上升和下降就好了,当然只有下降部分,也可以。希望你能够明白了!
4楼2011-09-04 21:56:33
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1289622

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 破土草儿 at 2011-09-04 21:56:33:
你好,我也不是什么大侠,都是同辈。蛋白沉淀就是把血浆(或者血清)里头的蛋白沉淀下来,方法就是加有机溶剂使蛋白沉淀,“有些情况下”,上清液可以直接上液相(需过滤膜,当然高速离心如一万二可以不过膜,或 ...

用beagle犬做实验,单次静脉注射量2.5ml/min多不?如果狗重为10Kg,注射量为25ml要推注多长时间,注射过快会不会把狗狗打死?
5楼2011-09-05 15:25:19
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1289622

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 1289622 at 2011-09-05 15:25:19:
用beagle犬做实验,单次静脉注射量2.5ml/min多不?如果狗重为10Kg,注射量为25ml要推注多长时间,注射过快会不会把狗狗打死?

上面错了,是2.5ml/Kg不是2.5ml/min
6楼2011-09-05 15:27:16
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苑子

银虫 (小有名气)

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2楼: Originally posted by 破土草儿 at 2011-09-02 22:53:28:
一般先用有机溶剂或者盐沉淀蛋白,再萃取药物。具体做法,往血浆(血清)中添加纯有机溶剂(或者一定浓度的盐,如乙腈)同时添加一些酸(或者碱,为了增加药物在有机相中的溶解率),涡旋离心,再添加萃取剂(如乙 ...

你好,请教一下“可以不必全部吸取上清液”怎么解释呢,如果血浆中药物含量就少,如果不全部取完不是测不出吗?
7楼2011-09-28 13:48:30
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苑子

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 破土草儿 at 2011-09-28 14:12:42:
你说,你去0.2ml,和取1ml,吹干同体积复溶,也就相差5倍,一个数量级都没有!所以不用担心检测不到,如果检测不到,就说明你的量本来就很少,达不到S/N大于3的要求。

oh,对啊,多谢
9楼2011-09-28 20:34:52
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sdlj_2009

银虫 (小有名气)

破土草儿 是个高手。
10楼2011-10-15 19:24:22
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