| 查看: 3973 | 回复: 18 | |||
jamy1989木虫 (小有名气)
|
[求助]
透析后蛋白沉淀
|
||
|
我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析复性，透析完后全部沉淀了，跑胶什么都没有！我透析的步骤是： 1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl 0.4M L-Arg 1mM EDTA 0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8 3、binding buffer 20mM磷酸钠 500mM氯化钠 5mM咪唑 PH=7.6 各位看看问题出在哪里呢？我每步在4度冰箱透析了24个小时！是不是我的蛋白浓度太大了呢？还是我透析的步骤太少！？或者其它什么原因？急呀？？？ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 biomatter |
» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
蛋白纯化遇到问题
已经有22人回复
- 求助硫酸铵沉淀蛋白质的问题
已经有12人回复
- 透析袋透析蛋白后，透析袋上有沉淀的蛋白，怎么处理？
已经有3人回复
- 蛋白经透析袋透析后出现浑浊，急求高手帮忙~！
已经有12人回复
- 蛋白包涵体透析后杂蛋白很多，请教原因
已经有10人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 硫酸铵沉淀后透析，里面的沉淀是什么？
已经有6人回复
- 【求助/交流】蛋白溶液浓缩
已经有32人回复
- 【求助/交流】纳豆激酶制备过程中蛋白含量测定结果令我很费解，希望各位大虾多多指教�
已经有14人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】请教：血红蛋白透析后什么条件浓缩在过sephadexG-75 啊
已经有5人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】蛋白质盐析及除盐
已经有14人回复
- 【求助/交流】蛋白透析总是出现沉淀
已经有9人回复
jamy1989
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在线: 91.8小时
- 虫号: 1655635
- 注册: 2012-03-01
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
jamy1989: 回帖置顶 2012-04-29 09:29:11
|
这次透析的蛋白溶度被我降低了！并且每升只透析20ml，我做了个对比试验： 1号瓶分别用4M 尿素、 1M尿素、binding buffer 透析！ 2号瓶分别用4M 尿素、 2M尿素、1M尿素、0M尿素、binding buffer 透析！ 结果1号瓶还是在用binding buffer透析是全部出现沉淀，取沉淀跑胶，能看到目的条带！ 2号瓶也是在用binding buffer 透析是全部出现沉淀（大约在透析3个小时的时候就有很多沉淀了），和1号瓶一样！另外当2号瓶透析到0M结束时我取了一些样保留下来，跑胶能看到目的条带！ 我在想是不是binding buffer 有问题呢？我底下准备用His-tag纯化蛋白，是不是一定要用binding buffer 透析呢？ |
15楼2012-04-29 09:28:23
jinpeng_6118
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 2
- 应助: 28 (小学生)
- 金币: 5027
- 散金: 25
- 红花: 2
- 帖子: 856
- 在线: 147.9小时
- 虫号: 1019189
- 注册: 2010-05-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物遗传学
2楼2012-04-23 11:13:57
3楼2012-04-23 11:29:38
ynkuaile
木虫 (小有名气)
- BioEPI: 2
- 应助: 86 (初中生)
- 金币: 1757.7
- 红花: 4
- 帖子: 270
- 在线: 73.4小时
- 虫号: 982579
- 注册: 2010-03-26
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2012-04-23 11:56:41
zc10052157
新虫 (正式写手)
- 应助: 23 (小学生)
- 金币: 431.3
- 红花: 1
- 帖子: 325
- 在线: 142.3小时
- 虫号: 1014987
- 注册: 2010-05-10
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2012-04-23 12:58:16
chlorella409
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
6楼2012-04-23 13:17:02
jamy1989
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在线: 91.8小时
- 虫号: 1655635
- 注册: 2012-03-01
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
7楼2012-04-24 15:03:45
jamy1989
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在线: 91.8小时
- 虫号: 1655635
- 注册: 2012-03-01
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
8楼2012-04-24 15:04:30
jamy1989
木虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 6557.3
- 散金: 1316
- 帖子: 155
- 在线: 91.8小时
- 虫号: 1655635
- 注册: 2012-03-01
- 专业: 病原细菌与放线菌生物学
9楼2012-04-24 15:05:55
chlorella409
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 3245.6
- 散金: 1000
- 红花: 4
- 帖子: 376
- 在线: 182.4小时
- 虫号: 1600249
- 注册: 2012-02-05
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
10楼2012-04-24 17:00:54