【答案】应助回帖

11楼2012-04-25 13:24:36

jamy1989

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10楼: Originally posted by chlorella409 at 2012-04-24 17:00:54:
许多蛋白中有Cys，且其中的－SH常作为活性中心发挥作用，或者两个－SH连接成二硫键，是维持蛋白质高级构象重要桥梁。－SH具有很强的还原性，溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化，从使蛋白失去活性。所以，在蛋 ...

我试试看！多谢帮助！

qwdr

12楼2012-04-27 16:52:32

jamy1989

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11楼: Originally posted by 鼓浪听涛 at 2012-04-25 13:24:36:
L-Arg主要是促进蛋白质溶解！

L-Arg不是能使不正确折叠的蛋白质结构以及不正确连接的二硫键变得不稳定，使折叠向正确方向进行，大幅提高包涵体蛋白的折叠效率吗？

qwdr

13楼2012-04-28 10:30:42

鼓浪听涛

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L-Arg主要是通过抑制蛋白聚集，促进溶解！

14楼2012-04-28 17:23:41

jamy1989

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jamy1989: 回帖置顶 2012-04-29 09:29:11

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2楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-04-23 11:13:57:
我觉得你的浓度差拉太多了吧，中间在多增加几个梯度吧，不用每步都24h，在2-4M之间时间久一些就可，其余的6-12h可以的

这次透析的蛋白溶度被我降低了！并且每升只透析20ml，我做了个对比试验：
1号瓶分别用4M 尿素、 1M尿素、binding buffer 透析！
2号瓶分别用4M 尿素、 2M尿素、1M尿素、0M尿素、binding buffer 透析！
结果1号瓶还是在用binding buffer透析是全部出现沉淀，取沉淀跑胶，能看到目的条带！
2号瓶也是在用binding buffer 透析是全部出现沉淀（大约在透析3个小时的时候就有很多沉淀了），和1号瓶一样！另外当2号瓶透析到0M结束时我取了一些样保留下来，跑胶能看到目的条带！
我在想是不是binding buffer 有问题呢？我底下准备用His-tag纯化蛋白，是不是一定要用binding buffer 透析呢？

qwdr

15楼2012-04-29 09:28:23