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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2026级博士研究生招生报考通知(长期有效)
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jamy1989

木虫 (小有名气)

[求助] 透析后蛋白沉淀

我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析复性,透析完后全部沉淀了,跑胶什么都没有!我透析的步骤是:
1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
3、binding buffer 20mM磷酸钠 500mM氯化钠 5mM咪唑 PH=7.6
各位看看问题出在哪里呢?我每步在4度冰箱透析了24个小时!是不是我的蛋白浓度太大了呢?还是我透析的步骤太少!?或者其它什么原因?急呀???
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qwdr
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jamy1989

木虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 鼓浪听涛 at 2012-04-25 13:24:36:
L-Arg主要是促进蛋白质溶解!

L-Arg不是能使不正确折叠的蛋白质结构以及不正确连接的二硫键变得不稳定,使折叠向正确方向进行,大幅提高包涵体蛋白的折叠效率吗?
qwdr
13楼2012-04-28 10:30:42
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查看全部 19 个回答

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-04-23 19:59:12
jamy1989: 金币+5, 有帮助 2012-04-24 15:02:35
我觉得你的浓度差拉太多了吧,中间在多增加几个梯度吧,不用每步都24h,在2-4M之间时间久一些就可,其余的6-12h可以的
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
2楼2012-04-23 11:13:57
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


蛋白最好是用来做啥的
3楼2012-04-23 11:29:38
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
透析法复性只适用于一部分蛋白,有一些蛋白的复性是需要其他的复性条件的,并不是除去尿素就可以。如果有文献报道透析法可以,你按2楼的试试。
4楼2012-04-23 11:56:41
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