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jamy1989

木虫 (小有名气)

[求助] 透析后蛋白沉淀

我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析复性,透析完后全部沉淀了,跑胶什么都没有!我透析的步骤是:
1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
3、binding buffer 20mM磷酸钠 500mM氯化钠 5mM咪唑 PH=7.6
各位看看问题出在哪里呢?我每步在4度冰箱透析了24个小时!是不是我的蛋白浓度太大了呢?还是我透析的步骤太少!?或者其它什么原因?急呀???
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qwdr
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不是朵拉

新虫 (初入文坛)

你好,请问你的问题解决了么?能分享一下经验么?不胜感激。
16楼2012-11-03 16:07:05
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jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-04-23 19:59:12
jamy1989: 金币+5, 有帮助 2012-04-24 15:02:35
我觉得你的浓度差拉太多了吧,中间在多增加几个梯度吧,不用每步都24h,在2-4M之间时间久一些就可,其余的6-12h可以的
人生百态原为海,看破红尘方为岸!
2楼2012-04-23 11:13:57
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


蛋白最好是用来做啥的
3楼2012-04-23 11:29:38
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
透析法复性只适用于一部分蛋白,有一些蛋白的复性是需要其他的复性条件的,并不是除去尿素就可以。如果有文献报道透析法可以,你按2楼的试试。
4楼2012-04-23 11:56:41
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