应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 透析后蛋白沉淀
31/1返回列表
查看: 3206  |  回复: 18
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

jamy1989

木虫 (小有名气)

[求助] 透析后蛋白沉淀

我的目的蛋白在用8M尿素溶解后透析复性，透析完后全部沉淀了，跑胶什么都没有！我透析的步骤是：
1、4M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
2、1M尿素 0.1M Tris-Hcl   0.4M L-Arg    1mM EDTA   0.2mM PMSF 5%甘油 PH=8
3、binding buffer 20mM磷酸钠 500mM氯化钠 5mM咪唑 PH=7.6
各位看看问题出在哪里呢？我每步在4度冰箱透析了24个小时！是不是我的蛋白浓度太大了呢？还是我透析的步骤太少！？或者其它什么原因？急呀？？？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

biomatter

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
qwdr
1楼2012-04-23 09:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jamy1989: 金币+5 2012-04-24 15:06:00
透析的时候要加一定的还原剂的吧，比如DDT，β-me之类的
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-23 13:17:02
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
jamy1989: 金币+5, ★有帮助 2012-04-27 16:52:18
许多蛋白中有Cys，且其中的－SH常作为活性中心发挥作用，或者两个－SH连接成二硫键，是维持蛋白质高级构象重要桥梁。－SH具有很强的还原性，溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化，从使蛋白失去活性。所以，在蛋白纯化和保存时，在溶液中加入一定量的还原剂，以免蛋白－SH被氧化而失活。浓度的话在2-5mM之间吧，还原剂还会降解，所以还要根据各自活性，按时间补加。L-Arg我没有使用过，不清楚具体什么作用。
赞一下 回复此楼
10楼2012-04-24 17:00:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jamy1989 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭