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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！ 已有5人参与

我在纯化蛋白透析时，如果我在透析buffer中加入一定浓度的盐，蛋白反而会沉淀，若不加盐，蛋白便不会沉，这是为什么啊？
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1楼 2011-01-10 09:41:35
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我个人认为这个比较难解释，跟蛋白表面所带的电荷有很大的关系，每个蛋白都是一个特例。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-10 09:43:33
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
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silicare(金币+1):谢谢参与 2011-01-10 11:58:08
跟该蛋白的性质有关，其他蛋白不一定是这样的，我们做透析的时候没出现该情况。
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3楼2011-01-10 10:10:44
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liulanhua

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-01-10 10:10:44:
跟该蛋白的性质有关，其他蛋白不一定是这样的，我们做透析的时候没出现该情况。

请问你的透析液是什么啊？我的洗脱蛋白的溶液里有咪唑，想通过透析除去咪唑，应该用什么洗脱液啊？PH值为多少？我的蛋白的的等电点是4左右。谢谢指点！
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努力会有收获！
4楼2011-04-25 19:26:24
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-04-25 23:40:15
引用回帖:
Originally posted by liulanhua at 2011-04-25 19:26:24:
请问你的透析液是什么啊？我的洗脱蛋白的溶液里有咪唑，想通过透析除去咪唑，应该用什么洗脱液啊？PH值为多少？我的蛋白的的等电点是4左右。谢谢指点！

只是为了透析除去咪唑，用Tris-HCl、PBS等都可以的。我们用20mM Tris-HCl, pH8.0。pH的选择跟你蛋白的稳定范围有关的。
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5楼2011-04-25 22:47:46
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liulanhua

金虫 (正式写手)
★
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Originally posted by lxj341401 at 2011-04-25 22:47:46:
只是为了透析除去咪唑，用Tris-HCl、PBS等都可以的。我们用20mM Tris-HCl, pH8.0。pH的选择跟你蛋白的稳定范围有关的。

怎么判断稳定性范围呢？那我的蛋白的等电点是4左右，是不是蛋白的额稳定范围就是PH=3~5啊？
过His纯化柱是用PH=8的含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白的，那我要透析的话需要调一个PH梯度吗？还是直接用PH=3~5的缓冲液透析？
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努力会有收获！
6楼2011-04-26 08:24:35
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by liulanhua at 2011-04-26 08:24:35:
怎么判断稳定性范围呢？那我的蛋白的等电点是4左右，是不是蛋白的额稳定范围就是PH=3~5啊？
过His纯化柱是用PH=8的含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白的，那我要透析的话需要调一个PH梯度吗？还是直接用PH=3~5的缓冲液 ...

稳定pH不是说就等电点附近一点点范围的，你纯化的时候都选择了pH8缓冲液，如果没有目的蛋白沉淀或者变性，说明你的蛋白在pH8是稳定的，那就用pH8溶液透析好了。
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7楼2011-04-26 09:47:24
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圆头

金虫 (小有名气)
★
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蛋白质在等电点附近容易沉淀，利用等电点沉淀蛋白就是这个道理。你的蛋白质等电点是4,应该用远离等电点的溶液如pH7左右低盐溶液透析。
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8楼2011-04-26 10:06:44
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liulanhua

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 圆头 at 2011-04-26 10:06:44:
蛋白质在等电点附近容易沉淀，利用等电点沉淀蛋白就是这个道理。你的蛋白质等电点是4,应该用远离等电点的溶液如pH7左右低盐溶液透析。

谢谢！
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9楼2011-04-26 12:51:48
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edoz1986

新虫 (小有名气)
可能你的蛋白疏水性氨基酸暴露在外的比较多
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10楼2013-05-23 09:42:09
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