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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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mumiancc

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题

请教下各位,我现在用0.01M PH7.2 Tris-Hcl缓冲液粗提的蛋白想要做细胞活性实验,想问下是否要将Tris-Hcl缓冲盐除去呢?如果除去我用透析的方法可行吗?如果透析的话,透析液直接用去离子水可以吗?透析后冻干,再用细胞培养基溶解,再做细胞实验,这样做合理吗?刚刚开始做实验,很晕,先谢谢各位了
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256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
silicare(金币+1): 谢谢参与 2012-02-20 12:39:48
这个不懂,个人理解如下仅供参考:Tris-Hcl在蛋白纯化时提供的是相对稳定的pH,PBS模拟的是生理状态下的盐浓度和渗透压。如果不透析,细胞实验结果与预期实验相符,能说的过去;如果差别较大,troubleshooting时,是因为Tris-Hcl呢?还是因为蛋白本身呢?不易判断。细胞在传代时也常用PBS洗涤,综上,个人意见是PBS透析。
2楼2012-02-19 13:39:22
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mumiancc

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by 256k at 2012-02-19 13:39:22:
这个不懂,个人理解如下仅供参考:Tris-Hcl在蛋白纯化时提供的是相对稳定的pH,PBS模拟的是生理状态下的盐浓度和渗透压。如果不透析,细胞实验结果与预期实验相符,能说的过去;如果差别较大,troubleshooting时, ...

谢谢了,还是想请教下,如果不做透析,直接带着tris-hcl冻干,冻干后再用培养基溶解,这样的话,tris-hcl会对细胞产生影响吗?就tris本身来说,它对细胞有影响吗?我要用小鼠成纤维细胞
3楼2012-02-19 15:27:47
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256k

新虫 (正式写手)

不知道
4楼2012-02-19 16:19:23
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xbingfeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
silicare(金币+2): 谢谢参与 2012-02-20 12:40:12
就Tris本来来说它对细胞的毒性不大, 除非浓度很高。。。
其实你应该这样想,一般来说你自己制备的蛋白质溶液一般都比较浓,加到细胞里面之前肯定要稀释的,稀释后Tris的浓度就没那么高了。。
5楼2012-02-19 18:44:42
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jingzhang08

新虫 (初入文坛)

同觉得tris没有太大的影响
6楼2012-02-19 23:07:18
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
silicare(金币+1): 谢谢参与 2012-02-20 12:40:25
个人认为,TRIS-HCl和PBS对细胞不应该存在太大影响。毕竟你加的量相对培养液来说是小量的。如果有影响,那肯定要用水来透析再冻干,带着TRIS冻干用培养基溶解根本就没意义,浪费时间,没准蛋白质活性还受影响。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

7楼2012-02-20 08:13:27
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mumiancc

新虫 (初入文坛)

送鲜花一朵
引用回帖:
: Originally posted by dnaxxx at 2012-02-20 08:13:27:
个人认为,TRIS-HCl和PBS对细胞不应该存在太大影响。毕竟你加的量相对培养液来说是小量的。如果有影响,那肯定要用水来透析再冻干,带着TRIS冻干用培养基溶解根本就没意义,浪费时间,没准蛋白质活性还受影响。

开始我也是这样想的,我试试吧 谢谢了 呵呵
8楼2012-02-28 09:40:55
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接用PBS透析,每一小时换一次透析液,透析6个小时就可以。
9楼2012-02-28 10:19:47
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
蛋白质必须在缓冲液中,绝对不能在什么都不含的水中。而且一般都会加一些保护剂防止蛋白降解、氧化等。
不知道楼主粗蛋白的用量。如果是微升级的话,就无所谓了,加进去那么点不会影响的。如果是毫升级的,就要考虑pH、渗透压什么的了。由于没做过,意见仅供楼主参考。
10楼2012-02-28 16:07:30
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