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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题
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mumiancc

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题

请教下各位，我现在用0.01M PH7.2 Tris-Hcl缓冲液粗提的蛋白想要做细胞活性实验，想问下是否要将Tris-Hcl缓冲盐除去呢？如果除去我用透析的方法可行吗？如果透析的话，透析液直接用去离子水可以吗？透析后冻干，再用细胞培养基溶解，再做细胞实验，这样做合理吗？刚刚开始做实验，很晕，先谢谢各位了
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1楼 2012-02-18 23:47:21
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256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+1): 谢谢参与 2012-02-20 12:39:48
这个不懂，个人理解如下仅供参考：Tris-Hcl在蛋白纯化时提供的是相对稳定的pH，PBS模拟的是生理状态下的盐浓度和渗透压。如果不透析，细胞实验结果与预期实验相符，能说的过去；如果差别较大，troubleshooting时，是因为Tris-Hcl呢？还是因为蛋白本身呢？不易判断。细胞在传代时也常用PBS洗涤，综上，个人意见是PBS透析。
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2楼2012-02-19 13:39:22
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mumiancc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 256k at 2012-02-19 13:39:22:
这个不懂，个人理解如下仅供参考：Tris-Hcl在蛋白纯化时提供的是相对稳定的pH，PBS模拟的是生理状态下的盐浓度和渗透压。如果不透析，细胞实验结果与预期实验相符，能说的过去；如果差别较大，troubleshooting时， ...

谢谢了，还是想请教下，如果不做透析，直接带着tris-hcl冻干，冻干后再用培养基溶解，这样的话，tris-hcl会对细胞产生影响吗？就tris本身来说，它对细胞有影响吗？我要用小鼠成纤维细胞
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3楼2012-02-19 15:27:47
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256k

新虫 (正式写手)
不知道
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4楼2012-02-19 16:19:23
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xbingfeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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silicare(金币+2): 谢谢参与 2012-02-20 12:40:12
就Tris本来来说它对细胞的毒性不大， 除非浓度很高。。。
其实你应该这样想，一般来说你自己制备的蛋白质溶液一般都比较浓，加到细胞里面之前肯定要稀释的，稀释后Tris的浓度就没那么高了。。
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5楼2012-02-19 18:44:42
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jingzhang08

新虫 (初入文坛)
同觉得tris没有太大的影响
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6楼2012-02-19 23:07:18
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dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+1): 谢谢参与 2012-02-20 12:40:25
个人认为，TRIS-HCl和PBS对细胞不应该存在太大影响。毕竟你加的量相对培养液来说是小量的。如果有影响，那肯定要用水来透析再冻干，带着TRIS冻干用培养基溶解根本就没意义，浪费时间，没准蛋白质活性还受影响。
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mumiancc
7楼2012-02-20 08:13:27
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mumiancc

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
楼: Originally posted by dnaxxx at 2012-02-20 08:13:27:
个人认为，TRIS-HCl和PBS对细胞不应该存在太大影响。毕竟你加的量相对培养液来说是小量的。如果有影响，那肯定要用水来透析再冻干，带着TRIS冻干用培养基溶解根本就没意义，浪费时间，没准蛋白质活性还受影响。

开始我也是这样想的，我试试吧 谢谢了 呵呵
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8楼2012-02-28 09:40:55
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yuanbo934

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接用PBS透析，每一小时换一次透析液，透析6个小时就可以。
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9楼2012-02-28 10:19:47
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Rubisco580

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白质必须在缓冲液中，绝对不能在什么都不含的水中。而且一般都会加一些保护剂防止蛋白降解、氧化等。
不知道楼主粗蛋白的用量。如果是微升级的话，就无所谓了，加进去那么点不会影响的。如果是毫升级的，就要考虑pH、渗透压什么的了。由于没做过，意见仅供楼主参考。
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10楼2012-02-28 16:07:30
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