应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题
51/1返回列表
查看: 3468  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mumiancc

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题

请教下各位，我现在用0.01M PH7.2 Tris-Hcl缓冲液粗提的蛋白想要做细胞活性实验，想问下是否要将Tris-Hcl缓冲盐除去呢？如果除去我用透析的方法可行吗？如果透析的话，透析液直接用去离子水可以吗？透析后冻干，再用细胞培养基溶解，再做细胞实验，这样做合理吗？刚刚开始做实验，很晕，先谢谢各位了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2012-02-18 23:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dnaxxx

至尊木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+1): 谢谢参与 2012-02-20 12:40:25
个人认为，TRIS-HCl和PBS对细胞不应该存在太大影响。毕竟你加的量相对培养液来说是小量的。如果有影响，那肯定要用水来透析再冻干，带着TRIS冻干用培养基溶解根本就没意义，浪费时间，没准蛋白质活性还受影响。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

mumiancc
7楼2012-02-20 08:13:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

256k

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+1): 谢谢参与 2012-02-20 12:39:48
这个不懂，个人理解如下仅供参考：Tris-Hcl在蛋白纯化时提供的是相对稳定的pH，PBS模拟的是生理状态下的盐浓度和渗透压。如果不透析，细胞实验结果与预期实验相符，能说的过去；如果差别较大，troubleshooting时，是因为Tris-Hcl呢？还是因为蛋白本身呢？不易判断。细胞在传代时也常用PBS洗涤，综上，个人意见是PBS透析。
赞一下 回复此楼
2楼2012-02-19 13:39:22
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mumiancc

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 256k at 2012-02-19 13:39:22:
这个不懂，个人理解如下仅供参考：Tris-Hcl在蛋白纯化时提供的是相对稳定的pH，PBS模拟的是生理状态下的盐浓度和渗透压。如果不透析，细胞实验结果与预期实验相符，能说的过去；如果差别较大，troubleshooting时， ...

谢谢了，还是想请教下，如果不做透析，直接带着tris-hcl冻干，冻干后再用培养基溶解，这样的话，tris-hcl会对细胞产生影响吗？就tris本身来说，它对细胞有影响吗？我要用小鼠成纤维细胞
赞一下 回复此楼
3楼2012-02-19 15:27:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xbingfeng

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
silicare(金币+2): 谢谢参与 2012-02-20 12:40:12
就Tris本来来说它对细胞的毒性不大， 除非浓度很高。。。
其实你应该这样想，一般来说你自己制备的蛋白质溶液一般都比较浓，加到细胞里面之前肯定要稀释的，稀释后Tris的浓度就没那么高了。。
赞一下 回复此楼
5楼2012-02-19 18:44:42
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭