| 查看: 2909 | 回复: 16 | |||
| 本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看 | |||
btx362237729金虫 (正式写手)
|
[求助]
最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
|
||
 以前没纯化过蛋白，听说透析的时候要加PMSF，我查了一下PMSF是抑制蛋白酶的，应该是防止目的蛋白被降解咯。。。。。而且PMSF有剧毒啊。。。 请问PMSF的量应该是加多少啊？ 还有透析的时间大概是多长啊？ 谢谢大家  |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 【分子生物】EPI帖 |
» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有71人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- （求助）乙烯吡咯烷酮（NVP）如何纯化
已经有3人回复
- 分子量300~500的 化学物质，如何透析出来？请点帖详看，得到您的帮助，十分感谢！
已经有1人回复
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- 关于细胞实验是否必须要除盐和蛋白质透析的问题
已经有11人回复
- 关于Ni-NTA纯化蛋白
已经有19人回复
- 组氨酸标记蛋白的纯化
已经有6人回复
- 蛋白质和DNA的差别
已经有6人回复
- 如何验证RNA是否与蛋白质发生相互作用？
已经有8人回复
- 生物大分子的分离纯化
已经有81人回复
- 镍柱纯化蛋白透析出现大量沉淀，请教
已经有18人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】蛋白酶抑制剂PMSF的使用问题
已经有13人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后透析及浓缩问题
已经有8人回复
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19820
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6621
- 在线: 2794小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
2楼2011-07-30 21:20:22
btx362237729
金虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 927.7
- 散金: 74
- 红花: 3
- 帖子: 745
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1069351
- 注册: 2010-08-04
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
导电率要怎么测 3楼2011-07-30 21:23:08
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - MolEPI: 46
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19820
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6621
- 在线: 2794小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
4楼2011-07-30 21:33:57
btx362237729
金虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 927.7
- 散金: 74
- 红花: 3
- 帖子: 745
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1069351
- 注册: 2010-08-04
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
一同学说以前加过 我再问问他 5楼2011-07-30 21:36:35
jinkui960
至尊木虫 (知名作家)
- MolEPI: 22
- 应助: 1220 (讲师)
- 金币: 10246.5
- 散金: 1000
- 红花: 42
- 沙发: 1
- 帖子: 5797
- 在线: 517.3小时
- 虫号: 1327313
- 注册: 2011-06-20
- 性别: GG
- 专业: 生物防治
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 23:05:53
btx362237729(金币+2): 非常感谢哦。。。。。但是过夜透析怎么换液，，，半夜换啊 2011-07-31 12:53:14
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 23:05:53
btx362237729(金币+2): 非常感谢哦。。。。。但是过夜透析怎么换液，，，半夜换啊 2011-07-31 12:53:14
|
PMSF是丝氨酸蛋白酶的专一性抑制剂，主要是防止目的蛋白在纯化的过程中被降解。 PMSF虽然有毒，但操作过程中戴手套，操作过程中小心一点，没有问题的。 PMSF的用量很少，以前我的实验结果表明1mM浓度的PMSF就可以抑制住丝氨酸蛋白酶的活性。 透析的时间一般是7-8个小时，也可以过夜透析，如果蛋白容易变性，最好在冰浴或4度透析，透析缓冲液要换3-4次。 |
6楼2011-07-30 21:57:52
jinkui960
至尊木虫 (知名作家)
- MolEPI: 22
- 应助: 1220 (讲师)
- 金币: 10246.5
- 散金: 1000
- 红花: 42
- 沙发: 1
- 帖子: 5797
- 在线: 517.3小时
- 虫号: 1327313
- 注册: 2011-06-20
- 性别: GG
- 专业: 生物防治
7楼2011-07-31 12:59:03
btx362237729
金虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 927.7
- 散金: 74
- 红花: 3
- 帖子: 745
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1069351
- 注册: 2010-08-04
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
8楼2011-07-31 13:07:52
jinkui960
至尊木虫 (知名作家)
- MolEPI: 22
- 应助: 1220 (讲师)
- 金币: 10246.5
- 散金: 1000
- 红花: 42
- 沙发: 1
- 帖子: 5797
- 在线: 517.3小时
- 虫号: 1327313
- 注册: 2011-06-20
- 性别: GG
- 专业: 生物防治
9楼2011-07-31 13:13:22
btx362237729
金虫 (正式写手)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 927.7
- 散金: 74
- 红花: 3
- 帖子: 745
- 在线: 66.3小时
- 虫号: 1069351
- 注册: 2010-08-04
- 性别: GG
- 专业: 疫苗学
10楼2011-07-31 13:16:43
28