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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good! 2011-07-31 14:17:02
引用回帖:
10楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-07-31 13:16:43:
但是缓冲液中有Tris 有EDTA。。。透析就是为了除掉这些盐。。。肯定不能用缓冲液啊

不一定呀，比如我的蛋白是经过硫酸铵沉淀以后溶解在磷酸盐缓冲液中，为了去除蛋白溶液中的过多的硫酸铵，我可以通过磷酸盐缓冲液进行透析，使硫酸铵逐渐被透析出去。

如果你的蛋白溶解在含有Tris 和EDTA的缓冲液中，你也可以利用从高到低浓度的Tris 缓冲液进行透析，比如你的蛋白最开始使溶解在20mM的Tris 缓冲液中，透析的时候可以采用梯度透析，先用10mM的Tris 缓冲液透析2-3小时，再用5mM的Tris 缓冲液透析2-3小时，最后用无菌纯水进行透析2-3小时，即可。
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11楼2011-07-31 13:25:31
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jinkui960 at 2011-07-31 13:25:31:
不一定呀，比如我的蛋白是经过硫酸铵沉淀以后溶解在磷酸盐缓冲液中，为了去除蛋白溶液中的过多的硫酸铵，我可以通过磷酸盐缓冲液进行透析，使硫酸铵逐渐被透析出去。

如果你的蛋白溶解在含有Tris 和EDTA的缓冲 ...

梯度透析是不错的办法 但是最终还是需要纯水，，，，，，额。。
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人生最黑暗的时光终于过去了
12楼2011-07-31 13:32:49
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
12楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-07-31 13:32:49:
梯度透析是不错的办法 但是最终还是需要纯水，，，，，，额。。

梯度透析可以避免蛋白由于溶液中离子浓度变化过大而变性。
推荐使用，呵呵！
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13楼2011-07-31 13:42:25
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by jinkui960 at 2011-07-31 13:42:25:
梯度透析可以避免蛋白由于溶液中离子浓度变化过大而变性。
推荐使用，呵呵！

总之，非常的感谢
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人生最黑暗的时光终于过去了
14楼2011-07-31 13:55:10
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-31 17:50:21
你的蛋白质要用来做什么，为什么一定要除去某种物质，如果不影响后续实验，就不用刻意除去。透析液的选用原则是方便你的后续实验，所以不一定要用纯水，适当的离子浓度可以增加蛋白质稳定性。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
15楼2011-07-31 16:36:00
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-31 16:36:00:
你的蛋白质要用来做什么，为什么一定要除去某种物质，如果不影响后续实验，就不用刻意除去。透析液的选用原则是方便你的后续实验，所以不一定要用纯水，适当的离子浓度可以增加蛋白质稳定性。

用来作为药物的。。所以必须要除去
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人生最黑暗的时光终于过去了
16楼2011-07-31 18:09:10
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
真牛，能做到药物。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
17楼2011-08-01 05:56:47
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