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btx362237729金虫 (正式写手)
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最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
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 以前没纯化过蛋白，听说透析的时候要加PMSF，我查了一下PMSF是抑制蛋白酶的，应该是防止目的蛋白被降解咯。。。。。而且PMSF有剧毒啊。。。 请问PMSF的量应该是加多少啊？ 还有透析的时间大概是多长啊？ 谢谢大家  |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2楼2011-07-30 21:20:22
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导电率要怎么测 3楼2011-07-30 21:23:08
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4楼2011-07-30 21:33:57
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一同学说以前加过 我再问问他 5楼2011-07-30 21:36:35
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西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 23:05:53
btx362237729(金币+2): 非常感谢哦。。。。。但是过夜透析怎么换液，，，半夜换啊 2011-07-31 12:53:14
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 23:05:53
btx362237729(金币+2): 非常感谢哦。。。。。但是过夜透析怎么换液，，，半夜换啊 2011-07-31 12:53:14
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PMSF是丝氨酸蛋白酶的专一性抑制剂，主要是防止目的蛋白在纯化的过程中被降解。 PMSF虽然有毒，但操作过程中戴手套，操作过程中小心一点，没有问题的。 PMSF的用量很少，以前我的实验结果表明1mM浓度的PMSF就可以抑制住丝氨酸蛋白酶的活性。 透析的时间一般是7-8个小时，也可以过夜透析，如果蛋白容易变性，最好在冰浴或4度透析，透析缓冲液要换3-4次。 |
6楼2011-07-30 21:57:52
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