应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
51/1返回列表
查看: 3026  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？

以前没纯化过蛋白，听说透析的时候要加PMSF，我查了一下PMSF是抑制蛋白酶的，应该是防止目的蛋白被降解咯。。。。。

而且PMSF有剧毒啊。。。

请问PMSF的量应该是加多少啊？
还有透析的时间大概是多长啊？

谢谢大家
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人生最黑暗的时光终于过去了
1楼 2011-07-30 20:22:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinkui960

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5, MolEPI+1): Good! 2011-07-30 23:05:53
btx362237729(金币+2): 非常感谢哦。。。。。但是过夜透析怎么换液，，，半夜换啊 2011-07-31 12:53:14
引用回帖:
Originally posted by btx362237729 at 2011-07-30 20:22:31:
以前没纯化过蛋白，听说透析的时候要加PMSF，我查了一下PMSF是抑制蛋白酶的，应该是防止目的蛋白被降解咯。。。。。

而且PMSF有剧毒啊。。。

请问PMSF的量应该是加多少啊？
还有透析的时间大概是多 ...

PMSF是丝氨酸蛋白酶的专一性抑制剂，主要是防止目的蛋白在纯化的过程中被降解。
PMSF虽然有毒，但操作过程中戴手套，操作过程中小心一点，没有问题的。

PMSF的用量很少，以前我的实验结果表明1mM浓度的PMSF就可以抑制住丝氨酸蛋白酶的活性。

透析的时间一般是7-8个小时，也可以过夜透析，如果蛋白容易变性，最好在冰浴或4度透析，透析缓冲液要换3-4次。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-07-30 21:57:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励下 2011-07-30 23:32:23
你的宿主是不是蛋白酶缺陷型的？

透析时间要看透析效果，透析之后测定一下透析液的电导率，如果还高就换液继续透析。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-30 21:20:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-30 21:20:22:
你的宿主是不是蛋白酶缺陷型的？

透析时间要看透析效果，透析之后测定一下透析液的电导率，如果还高就换液继续透析。

并不是蛋白酶缺陷型的。。。。。但是我们发现菌体超声裂解后 上清放一段时间了（-20℃）蛋白的量还是很多

导电率要怎么测
赞一下 回复此楼
人生最黑暗的时光终于过去了
3楼2011-07-30 21:23:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
电导率有仪器测的，如果你没有，就换多几次透析液。

我没加过那东西。
赞一下 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-07-30 21:33:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭