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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
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btx362237729

金虫 (正式写手)

[求助] 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？

以前没纯化过蛋白，听说透析的时候要加PMSF，我查了一下PMSF是抑制蛋白酶的，应该是防止目的蛋白被降解咯。。。。。

而且PMSF有剧毒啊。。。

请问PMSF的量应该是加多少啊？
还有透析的时间大概是多长啊？

谢谢大家
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人生最黑暗的时光终于过去了
1楼 2011-07-30 20:22:31
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jinkui960

至尊木虫 (知名作家)
引用回帖:
8楼: Originally posted by btx362237729 at 2011-07-31 13:07:52:
最后请教一下 透析液就是纯水么 灭过菌的

一般来说，透析液应该是缓冲液，因为有些蛋白在纯水中容易变性。

主要看你的蛋白溶解在那种缓冲液（溶液）中，这种缓冲液就可以作为你的透析液。
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9楼2011-07-31 13:13:22
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励下 2011-07-30 23:32:23
你的宿主是不是蛋白酶缺陷型的？

透析时间要看透析效果，透析之后测定一下透析液的电导率，如果还高就换液继续透析。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2011-07-30 21:20:22
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btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-30 21:20:22:
你的宿主是不是蛋白酶缺陷型的？

透析时间要看透析效果，透析之后测定一下透析液的电导率，如果还高就换液继续透析。

并不是蛋白酶缺陷型的。。。。。但是我们发现菌体超声裂解后 上清放一段时间了（-20℃）蛋白的量还是很多

导电率要怎么测
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人生最黑暗的时光终于过去了
3楼2011-07-30 21:23:08
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
电导率有仪器测的，如果你没有，就换多几次透析液。

我没加过那东西。
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4楼2011-07-30 21:33:57
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