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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】含咪唑的蛋白免疫兔子

请问下各位朋友,知不知道用含咪唑的蛋白去免疫兔子制备抗体有什么不利的影响,具体咪唑最好低于哪个浓度?我的蛋白是原核表达的,用镍柱纯化的,所以不可避免有咪唑,我在考虑要不要透析,再去免疫兔子。
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

★ ★ ★
scelab(金币+3):鼓励新虫!欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-17 16:22:56
引用回帖:
Originally posted by 辉辉集团 at 2010-08-17 08:27:13:
请问下各位朋友,知不知道用含咪唑的蛋白去免疫兔子制备抗体有什么不利的影响,具体咪唑最好低于哪个浓度?我的蛋白是原核表达的,用镍柱纯化的,所以不可避免有咪唑,我在考虑要不要透析,再去免疫兔子。

不用考虑,直接免疫就行了。兔子的耐受能力很强,8M urea等,都直接可以加进去。咪唑是小分子,它可以代谢掉,不会影响抗体制备的,很多公司的抗体都不取出咪唑的。
3楼2010-08-17 09:14:51
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jasco

木虫 (正式写手)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-17 16:23:11
不用透析的,直接上把,兔子很强大,对多抗没多大影响
4楼2010-08-17 09:16:28
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普通回帖

dianaofyezi

金虫 (正式写手)

最好是透析之后再免疫。
52187644
2楼2010-08-17 08:54:33
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夜龙舞

金虫 (小有名气)

★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-08-17 16:23:16
原核的融和表达容易产生包涵体内,这样的蛋白没有活性,虽说化学性质不变,但物理结构,免疫原性发生改变,所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。
5楼2010-08-17 09:18:36
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jasco

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 夜龙舞 at 2010-08-17 09:18:36:
原核的融和表达容易产生包涵体内,这样的蛋白没有活性,虽说化学性质不变,但物理结构,免疫原性发生改变,所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。

用包涵体打兔子制备多抗的多了去了,甚至还有将sds-page胶切碎来免疫用的,
6楼2010-08-17 09:43:41
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

我做的蛋白表达在上清,可以不用透析吗?

引用回帖:
Originally posted by 夜龙舞 at 2010-08-17 09:18:36:
原核的融和表达容易产生包涵体内,这样的蛋白没有活性,虽说化学性质不变,但物理结构,免疫原性发生改变,所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。

我做的蛋白表达在上清,可以不用透析吗?
7楼2010-08-17 14:52:59
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 夜龙舞 at 2010-08-17 09:18:36:
原核的融和表达容易产生包涵体内,这样的蛋白没有活性,虽说化学性质不变,但物理结构,免疫原性发生改变,所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。

我不这样认为,看你要干什么了,如果只是wb,变性的抗原免疫完全没有问题,我们实验室很多抗原都是变性的,效果也一样好,如果是ELISA或者IHC,最好Native form.
8楼2010-08-18 07:46:41
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三妹妹

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-18 07:46:41:

我不这样认为,看你要干什么了,如果只是wb,变性的抗原免疫完全没有问题,我们实验室很多抗原都是变性的,效果也一样好,如果是ELISA或者IHC,最好Native form.

弱弱的问一下,表达出来的蛋白再拿去做抗体的目的是什么呀?我以前看到实验室他们做单链抗体,好像是直接用表达的蛋白建ELISA的??先谢谢那:)
9楼2010-08-18 09:00:51
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夜龙舞

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 辉辉集团 at 2010-08-17 14:52:59:

我做的蛋白表达在上清,可以不用透析吗?

在上清就不用透析了,如果表达量低,你要用中性盐浓缩的话,要透析除盐。
10楼2010-08-18 09:03:56
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