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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】含咪唑的蛋白免疫兔子
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】含咪唑的蛋白免疫兔子

请问下各位朋友，知不知道用含咪唑的蛋白去免疫兔子制备抗体有什么不利的影响，具体咪唑最好低于哪个浓度？我的蛋白是原核表达的，用镍柱纯化的，所以不可避免有咪唑，我在考虑要不要透析,再去免疫兔子。
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1楼 2010-08-17 08:27:13
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
scelab(金币+3):鼓励新虫！欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-17 16:22:56
引用回帖:
Originally posted by 辉辉集团 at 2010-08-17 08:27:13:
请问下各位朋友，知不知道用含咪唑的蛋白去免疫兔子制备抗体有什么不利的影响，具体咪唑最好低于哪个浓度？我的蛋白是原核表达的，用镍柱纯化的，所以不可避免有咪唑，我在考虑要不要透析,再去免疫兔子。

不用考虑，直接免疫就行了。兔子的耐受能力很强，8M urea等，都直接可以加进去。咪唑是小分子，它可以代谢掉，不会影响抗体制备的，很多公司的抗体都不取出咪唑的。
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3楼2010-08-17 09:14:51
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jasco

木虫 (正式写手)
★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-17 16:23:11
不用透析的，直接上把，兔子很强大，对多抗没多大影响
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4楼2010-08-17 09:16:28
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
最好是透析之后再免疫。
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52187644
2楼2010-08-17 08:54:33
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夜龙舞

金虫 (小有名气)
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-08-17 16:23:16
原核的融和表达容易产生包涵体内，这样的蛋白没有活性，虽说化学性质不变，但物理结构，免疫原性发生改变，所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。
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5楼2010-08-17 09:18:36
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 夜龙舞 at 2010-08-17 09:18:36:
原核的融和表达容易产生包涵体内，这样的蛋白没有活性，虽说化学性质不变，但物理结构，免疫原性发生改变，所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。

用包涵体打兔子制备多抗的多了去了，甚至还有将sds-page胶切碎来免疫用的，
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6楼2010-08-17 09:43:41
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辉辉集团

银虫 (正式写手)

我做的蛋白表达在上清，可以不用透析吗？

引用回帖:
Originally posted by 夜龙舞 at 2010-08-17 09:18:36:
原核的融和表达容易产生包涵体内，这样的蛋白没有活性，虽说化学性质不变，但物理结构，免疫原性发生改变，所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。

我做的蛋白表达在上清，可以不用透析吗？
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7楼2010-08-17 14:52:59
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 夜龙舞 at 2010-08-17 09:18:36:
原核的融和表达容易产生包涵体内，这样的蛋白没有活性，虽说化学性质不变，但物理结构，免疫原性发生改变，所以一定要用有活性的蛋白做免疫原。透析可以复性。

我不这样认为，看你要干什么了，如果只是wb，变性的抗原免疫完全没有问题，我们实验室很多抗原都是变性的，效果也一样好，如果是ELISA或者IHC，最好Native form.
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8楼2010-08-18 07:46:41
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三妹妹

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sqhnsd at 2010-08-18 07:46:41:

我不这样认为，看你要干什么了，如果只是wb，变性的抗原免疫完全没有问题，我们实验室很多抗原都是变性的，效果也一样好，如果是ELISA或者IHC，最好Native form.

弱弱的问一下，表达出来的蛋白再拿去做抗体的目的是什么呀？我以前看到实验室他们做单链抗体，好像是直接用表达的蛋白建ELISA的？？先谢谢那：）
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9楼2010-08-18 09:00:51
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夜龙舞

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 辉辉集团 at 2010-08-17 14:52:59:

我做的蛋白表达在上清，可以不用透析吗？

在上清就不用透析了，如果表达量低，你要用中性盐浓缩的话，要透析除盐。
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10楼2010-08-18 09:03:56
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