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honglanbai

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白沉淀或者浓缩的方法已有6人参与

我的蛋白是糖蛋白,在培养细胞的培养基中,我做考马斯亮蓝染色但是蛋白浓度太低了,有谁知道我如何才能将蛋白浓缩,使我在制样的时候浓度会高些,我用过丙酮沉淀,但是再溶解很困难,谢谢大家啊
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ben1147

木虫 (正式写手)


honglanbai(金币+5):谢谢参与
冻干试过么?
先把样品冻了,然后真空抽干?
2楼2010-06-03 14:11:22
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honglanbai

木虫 (正式写手)

我们没有冻干的条件
3楼2010-06-03 14:33:41
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ben1147

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
那就盐析吧,不过摸条件估计挺麻烦
4楼2010-06-03 14:44:10
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honglanbai

木虫 (正式写手)

有谁具体做过吗
5楼2010-06-03 15:14:41
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-06-03 19:04:19
最简单是用离心式的蛋白浓缩管
6楼2010-06-03 15:34:38
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jingcp200320

银虫 (小有名气)

★ ★
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-06-03 19:04:01
第一种方法是超滤,使用超滤管就可以了。
第二种方法你可以透析,使用40%蔗糖浓缩,一般5mL体积浓缩2h就会达到1mL左右。  切记,40%蔗糖要溶解在你的蛋白缓冲液中,
7楼2010-06-03 16:21:43
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85715623

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议减压旋蒸,可以低温下操作。
8楼2010-06-03 16:25:37
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honglanbai

木虫 (正式写手)

我是想浓缩下用来跑电泳,就是做个考染或者银染,但是我们现在的量比较低,看不清楚,用丙酮沉淀会高点,但是有限。

[ Last edited by honglanbai on 2010-6-8 at 10:12 ]
9楼2010-06-08 10:11:00
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

超低温抽真空。这个对蛋白的破坏不大,还比较简单。
10楼2010-06-08 10:54:02
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