| 查看: 5150 | 回复: 13 | ||||||||
[交流]
【求助】超滤管的使用
|
||||||||
| 请问有高手知道怎么用超滤管，如何选择合适规格的，尽可能详细 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 药物控释 | 仪器技术问题杂锦 | 百科全书 | 专业 |
| 出去 |
» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有3人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 有关Millipore超滤离心管的问题，急！
已经有14人回复
- 求教：关于超滤离心管的使用问题
已经有4人回复
- 超滤离心管
已经有6人回复
- 【求助/交流】关于millpore超滤离心管
已经有8人回复
- 【求助/交流】又没人用过Q Sepharose® Fast Flow这种阴离子交换柱，请教一下洗脱
已经有11人回复
- 【求助/交流】millipore超滤管超滤
已经有8人回复
- millipore超滤离心管
已经有7人回复
- 【求助/交流】【求助】millipore超滤离心管想重复使用，请问如何清洗和保存？
已经有8人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
苏州国家实验室和中国科学技术大学联培博士招生
+1/177
-
坐标广州，征女友
+2/152
-
陆军军医大学第二附属医院（新桥医院）冉茜课题组招聘科研人员
+1/79
-
贺电中定位于“积极作用”，是不是对基金委工作不够满意？
+1/75
-
北京-89175-事业单位-诚征女友
+1/62
-
海法大学线上开放日
+1/37
-
国家级青年人才课题组招收2026级硕士研究生
+1/33
-
海南大学海洋技术与装备学院-科研助理招聘（可读博）膜分离水处理方向
+1/32
-
国家级青年人才课题组招收2026级硕士研究生
+1/32
-
英国布里斯托大学诚招博士生，博士后和联合培养生
+1/23
-
上海交通大学-宁波东方理工大学联合培养博士生 – 力学
+1/12
-
26申博自荐求博导-生物传感分析方向
+1/9
-
湖南大学-分析检测技术和生物柔性传感器-招收1名博士研究生 (2026年，第二批)
+1/9
-
英国伯明翰大学Dr Yueting Sun招收博士生/访问学生学者（化学材料力学工程等方向）
+1/8
-
国家“双一流”建设高校-南京林业大学-国家级青年人才团队 招2026级申请考核制博士
+1/8
-
哈工大（深圳）国家级青年人才 钟颖教授课题组 新增26级博士名额！欢迎报名！
+1/5
-
澳科大招收2026年秋季药物递送/生物材料方向硕士研究生（3月5日18:00报名截止）
+1/5
-
中国地质大学（武汉）杨华明课题组刘磊研究员招收冶金固废资源高值化利用方向博士
+1/4
-
上海大学生物有机电子材料及器件团队博士研究生招聘
+1/4
-
大连海事大学船舶洁净能源研究中心2026年博士研究生招生启事
+1/1
超滤管使用方法和注意事项
spsgirl(金币+4): 2011-04-02 14:00:24
|
蛋白浓缩和换Buffer通常使用的超滤管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超滤管（MWCO10kD）。也有其它型号 的、不同体积大小和MWCO超滤管可选，视目的蛋白的分子量与浓缩前体积、浓缩目标体积而定。可重复使用，使用一次就扔掉太浪费。以下是个人总结的使用方 法和注意事项。 1、选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓缩体积，最常见的是Ultra-15（10kD）。到底选择多大截留分子量比较合适呢？10kDa、 5kDa、还是30kDa？通常应截留分子量不应大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量为35kDa，就可以选择10kDa截留分子量的超滤管。若目的蛋白分子量为10kD左右，则可以用截留分子量3kD的超滤管。认真阅读使用说明书，注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同，表格中有。 2、新买来的超滤是干燥的，使用前加入MilliQ水，水量完全过膜，冰浴或冰箱里预冷几分钟。然后将水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超过管顶的白线为准。操作要轻，加入蛋白液前，超滤管需要插在冰上预冷。 3、平衡。质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。具体可参阅附件里的说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。注意，一定要等离心机达到目的转速之后，方可离开 离心机，否则离心机出问题时，无法第一时间处理，后果不可预测！膜与转轴的方向根据说明书调整（角转离心机的情况是膜与轴垂直）。在实际使用中，一般转速 开的比说明书里的要低，这样可以延长离心管的使用寿命。 4、当浓缩到剩下1ml时，【取50ul国产Bradford溶液，加入10ul流穿，看有没变蓝色，以此判断超滤管是否漏掉蛋白。如果管漏了，将上层和流穿重新倒入新管中开始超滤。要精确判断是否漏管，用5mgml的BSA离心10min，再取流穿，跑蛋白胶或Bradford粗测】，继续加入剩下的蛋白液浓缩（在冰上操作，防止蛋白受热），直到所有浓缩液都加完为止。离心过程中注意是否发生蛋白沉淀，导致堵管。若发生沉淀，要确定沉淀的具体原因，是蛋白浓度过高还是Buffer不合适；前者可用多根超滤管同时超滤，降低浓度的办法解决，后者的方法是换不同的Buffer，直到蛋白不发生沉淀为 止。 5、前面几步用以浓缩蛋白，如果要换Buffer，在总蛋白液浓缩至1ml左右的时候，轻轻加入新的Buffer（经0.22um超滤膜超滤），再 浓缩至1ml左右，连续三次，最后一次的浓缩终体积根据需要的蛋白浓度而定，一般不多于500ul，也有浓缩至200ul以内的情况。按照每次至少10倍 左右的体积浓缩算，三次达到1000倍以上，基本上可以达到换buffer的目的。 6、取出最终蛋白浓缩液的操作在冰上操作，用黄枪头（200ul）取，轻轻顺着边缘插入枪头，轻轻吹打、混匀蛋白液，注意不要碰到超滤膜，然后吸取 浓缩液，每次吸接近200ul，直到吸完。管底剩下的最后一点浓缩液不必吸取，否则难度太大，有可能损坏超滤膜。最后加入MilliQ水到超滤管中，没过 超滤膜，防止膜失水变干。 7、以下是处理超滤管，重复利用超滤管的步骤。 8、倒出超滤管里的水，用milliQ水轻轻润洗几次，【若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲】然后加入0.2M的NaOH溶液，室温放置20min，期间平衡超滤管。再离心10min。倒出残留的NaOH溶液，将 管芯浸入MilliQ水的烧杯(1或2L)中,放置几个小时,再换新的水,放置几个小时，不断稀释NaOH浓度。50ml管和盖子用自来水洗，内壁再用 MilliQ水洗干净。 9、取出浸没的管芯，加至接近满的MilliQ水，50ml管也加满MilliQ水，将管芯慢慢放入50ml离心管，排出部分水，然后盖上盖子，放4度保存，直到下次使用。一般来说，按照上述步骤和注意事项，每根管用三四年不会坏。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
向西的风2楼2011-03-30 00:51:39
3楼2011-03-30 00:52:29
4楼2011-04-02 11:45:31
5楼2011-04-02 14:02:07
6楼2011-04-02 14:03:25
7楼2011-04-03 10:45:14
8楼2011-04-06 12:56:41
9楼2011-04-06 23:44:12
10楼2011-04-06 23:55:15
11楼2011-11-09 15:38:55
12楼2012-06-06 17:52:30
13楼2014-07-10 22:53:23
14楼2015-09-08 17:35:18
