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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】又没人用过Q Sepharose® Fast Flow这种阴离子交换柱，请教一下洗脱
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zhengsimin

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】又没人用过Q Sepharose® Fast Flow这种阴离子交换柱，请教一下洗脱已有8人参与

实验中蛋白能够结合上去，并且用梯度NaCl（配置在低浓度的甘氨酸-氢氧化钠中，大概在0.6mol/l NaCl时被洗脱）洗脱下来。

问题是这个蛋白比较麻烦的是要求回收的蛋白中尽量不含Na离子（或者尽量低浓度），想问问能不能换成其他的试剂进行洗脱（不含Na离子，钾离子也不行……）

——————————————
Ps：我现在的解决办法是将过柱回收的样品再透析或者超滤，略感烦闷，请高手帮帮忙
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1楼2010-09-15 12:36:04
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月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-15 23:28:01
先洗脱下来，再使用脱盐柱脱盐或者使用透析或者超滤方法脱盐都可以。

我询问师姐，师姐说也可以使用氯化铵洗，你可也以尝试一下。
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2楼2010-09-15 13:22:55
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zhengsimin

金虫 (初入文坛)
[quote]Originally posted by 月月大可 at 2010-09-15 13:22:55:

谢谢了！氯化铵我会试一下

不知道有没有人试着用超滤管来脱盐的？楼下的兄弟如果用过，能不能给介绍下，是不是多次离心，每次离心后新加不含盐的缓冲液？大概离心速度和时间是多少？
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3楼2010-09-15 13:30:24
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jasco

木虫 (正式写手)
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超滤管不方便，透析吧
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4楼2010-09-15 13:41:40
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zhengsimin

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-15 13:41:40:
超滤管不方便，透析吧

我觉得超滤比透析方便多了，透析袋的预处理挺麻烦的，而且花费的时间也长。
、楼上的兄弟能说具体点吗
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5楼2010-09-15 14:11:44
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heismeng

金虫 (小有名气)
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透析多简单啊
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6楼2010-09-15 15:13:04
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
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透析最简单，而且蛋白基本不损失
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7楼2010-09-15 15:15:54
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
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我平常换buffer都是使用超滤管，你可以按照稀释倍数来计算。比如你将1ml 500mM的稀释为15ml，浓缩至1ml。反复两次相当于稀释了225倍，这样500mM的盐基本上就成5mM不到。为了更加彻底，你可以进行上千倍的稀释。

这种方法不适合浓缩过程中有沉淀出现的蛋白，不然蛋白沉淀会堵塞滤膜，致使浓缩的速度非常慢。
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8楼2010-09-15 15:16:21
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cgt713

银虫 (小有名气)
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透析成本低一点 超滤成本高
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9楼2010-09-15 15:37:20
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jasco

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
Originally posted by zhengsimin at 2010-09-15 14:11:44:



我觉得超滤比透析方便多了，透析袋的预处理挺麻烦的，而且花费的时间也长。
、楼上的兄弟能说具体点吗

超滤管价格贵，每次处理量有限制，蛋白有损失

透析袋我都是一次煮一批，然后慢慢用
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10楼2010-09-15 15:43:18
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