应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】又没人用过Q Sepharose® Fast Flow这种阴离子交换柱，请教一下洗脱
121/2返回列表12下一页
查看: 2687  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhengsimin

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】又没人用过Q Sepharose® Fast Flow这种阴离子交换柱，请教一下洗脱 已有8人参与

实验中蛋白能够结合上去，并且用梯度NaCl（配置在低浓度的甘氨酸-氢氧化钠中，大概在0.6mol/l NaCl时被洗脱）洗脱下来。

问题是这个蛋白比较麻烦的是要求回收的蛋白中尽量不含Na离子（或者尽量低浓度），想问问能不能换成其他的试剂进行洗脱（不含Na离子，钾离子也不行……）

——————————————
Ps：我现在的解决办法是将过柱回收的样品再透析或者超滤，略感烦闷，请高手帮帮忙
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-09-15 12:36:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-09-15 23:28:01
先洗脱下来，再使用脱盐柱脱盐或者使用透析或者超滤方法脱盐都可以。

我询问师姐，师姐说也可以使用氯化铵洗，你可也以尝试一下。
赞一下(4人) 回复此楼
2楼2010-09-15 13:22:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhengsimin

金虫 (初入文坛)
[quote]Originally posted by 月月大可 at 2010-09-15 13:22:55:

谢谢了！氯化铵我会试一下

不知道有没有人试着用超滤管来脱盐的？楼下的兄弟如果用过，能不能给介绍下，是不是多次离心，每次离心后新加不含盐的缓冲液？大概离心速度和时间是多少？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-09-15 13:30:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
超滤管不方便，透析吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-15 13:41:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhengsimin

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-09-15 13:41:40:
超滤管不方便，透析吧

我觉得超滤比透析方便多了，透析袋的预处理挺麻烦的，而且花费的时间也长。
、楼上的兄弟能说具体点吗
赞一下 回复此楼
5楼2010-09-15 14:11:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heismeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
透析多简单啊
回复此楼
6楼2010-09-15 15:13:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sqhnsd

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
透析最简单，而且蛋白基本不损失
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-09-15 15:15:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我平常换buffer都是使用超滤管，你可以按照稀释倍数来计算。比如你将1ml 500mM的稀释为15ml，浓缩至1ml。反复两次相当于稀释了225倍，这样500mM的盐基本上就成5mM不到。为了更加彻底，你可以进行上千倍的稀释。

这种方法不适合浓缩过程中有沉淀出现的蛋白，不然蛋白沉淀会堵塞滤膜，致使浓缩的速度非常慢。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-09-15 15:16:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cgt713

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
透析成本低一点 超滤成本高
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-09-15 15:37:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by zhengsimin at 2010-09-15 14:11:44:



我觉得超滤比透析方便多了，透析袋的预处理挺麻烦的，而且花费的时间也长。
、楼上的兄弟能说具体点吗

超滤管价格贵，每次处理量有限制，蛋白有损失

透析袋我都是一次煮一批，然后慢慢用
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-09-15 15:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhengsimin 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭