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zhengsimin

金虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】又没人用过Q Sepharose® Fast Flow这种阴离子交换柱,请教一下洗脱 已有8人参与

实验中蛋白能够结合上去,并且用梯度NaCl(配置在低浓度的甘氨酸-氢氧化钠中,大概在0.6mol/l NaCl时被洗脱)洗脱下来。

问题是这个蛋白比较麻烦的是要求回收的蛋白中尽量不含Na离子(或者尽量低浓度),想问问能不能换成其他的试剂进行洗脱(不含Na离子,钾离子也不行……)

——————————————
Ps:我现在的解决办法是将过柱回收的样品再透析或者超滤,略感烦闷,请高手帮帮忙
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月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我平常换buffer都是使用超滤管,你可以按照稀释倍数来计算。比如你将1ml 500mM的稀释为15ml,浓缩至1ml。反复两次相当于稀释了225倍,这样500mM的盐基本上就成5mM不到。为了更加彻底,你可以进行上千倍的稀释。

这种方法不适合浓缩过程中有沉淀出现的蛋白,不然蛋白沉淀会堵塞滤膜,致使浓缩的速度非常慢。
8楼2010-09-15 15:16:21
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月月大可

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-09-15 23:28:01
先洗脱下来,再使用脱盐柱脱盐或者使用透析或者超滤方法脱盐都可以。

我询问师姐,师姐说也可以使用氯化铵洗,你可也以尝试一下。
2楼2010-09-15 13:22:55
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zhengsimin

金虫 (初入文坛)

[quote]Originally posted by 月月大可 at 2010-09-15 13:22:55:

谢谢了!氯化铵我会试一下

不知道有没有人试着用超滤管来脱盐的?楼下的兄弟如果用过,能不能给介绍下,是不是多次离心,每次离心后新加不含盐的缓冲液?大概离心速度和时间是多少?
3楼2010-09-15 13:30:24
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jasco

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
超滤管不方便,透析吧
4楼2010-09-15 13:41:40
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