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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » HPLC测血药浓度血样处理问题
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vitc

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] HPLC测血药浓度血样处理问题

求助各位：准备用HPLC测小鼠的血浓度，用眼眶取血，请问血取出来后，要如何处理，才能上液相。可否给个具体方法。文献中有的提到要用萃取柱什么的，不明白，在这请教大家啦。谢谢
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1楼2012-05-10 15:04:38
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-11 21:14:46
取血后，需要加抗凝剂抗凝，然后离心得血浆
血浆需经沉淀蛋白或者萃取后，才可以进HPLC
先期需要用标准品加入空白血浆中，建立分析方法，具体方法可参考SFDA《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》
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3楼2012-05-10 15:23:59
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
3楼正解，附件详见：
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=12335274j654d3fjlkzii8sr
蛋白沉淀或萃取后，再用微孔滤膜过滤一下。
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守候在风中的宁静。
6楼2012-05-11 14:24:37
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-05-22 15:35:44:
你好！请问一下如果我的药物是蛋白，血浆该怎么处理，进HPLC呢？

是蛋白还是多肽，多肽我之前做过，蛋白没有接触过，如果你这个药物不是全新的，可以参考一下文献，搜一下：你的药物的英文加上HPLC或plasma，看看之前有没有人建过分析方法。
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8楼2012-05-22 17:17:33
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-05-22 18:14:28:
是蛋白质，59KD，文献没有的，是自己构建质粒表达的蛋白

如果是蛋白的话，是不是可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测？
如果直接用HPLC检测，看文献一般是先用胰蛋白酶消化后定量消化得到的肽。
比如这两篇文献：http://www.tno.nl/downloads/Anal ... 0using%20LC-MS1.pdf
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/rcm.4856/pdf
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10楼2012-05-22 19:14:37
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谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

若要测血细胞的浓度，低速离心得到血细胞，再让血细胞溶血，去蛋白，检测血细胞中的血药浓度！
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13楼2012-05-29 08:07:18
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普通回帖

谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个问题上，你要看你要测的是血浆里边的血药浓度，还是血细胞的浓度！
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2楼2012-05-10 15:21:50
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小胡0905

银虫 (小有名气)
楼上思路很正确！
另外，如果是测血浆中的药物浓度，一般是要经过样品的前处理的，一般要离心
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真理越辩越明
4楼2012-05-10 15:24:34
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谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小胡0905 at 2012-05-10 15:24:34:
楼上思路很正确！
另外，如果是测血浆中的药物浓度，一般是要经过样品的前处理的，一般要离心

若是测血浆浓度，眼眶取血后，加抗凝剂，但是一般上正式试验之前，先得看，做个与实验，用甲醇或者已经沉淀去蛋白后，处理液中的目标化合物的浓度，根据这个来定线性范围，若处理液中浓度不够，再用液液萃取的办法浓缩进样，一般用有机试剂沉淀蛋白，操作简单，较干净的是液液萃取！
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5楼2012-05-10 15:38:23
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-05-10 15:23:59:
取血后，需要加抗凝剂抗凝，然后离心得血浆
血浆需经沉淀蛋白或者萃取后，才可以进HPLC
先期需要用标准品加入空白血浆中，建立分析方法，具体方法可参考SFDA《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》

你好！请问一下如果我的药物是蛋白，血浆该怎么处理，进HPLC呢？
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7楼2012-05-22 15:35:44
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-05-22 17:17:33:
是蛋白还是多肽，多肽我之前做过，蛋白没有接触过，如果你这个药物不是全新的，可以参考一下文献，搜一下：你的药物的英文加上HPLC或plasma，看看之前有没有人建过分析方法。

是蛋白质，59KD，文献没有的，是自己构建质粒表达的蛋白
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9楼2012-05-22 18:14:28
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