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[求助] HPLC测血药浓度血样处理问题

求助各位:准备用HPLC测小鼠的血浓度,用眼眶取血,请问血取出来后,要如何处理,才能上液相。可否给个具体方法。文献中有的提到要用萃取柱什么的,不明白,在这请教大家啦。谢谢
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-11 21:14:46
取血后,需要加抗凝剂抗凝,然后离心得血浆
血浆需经沉淀蛋白或者萃取后,才可以进HPLC
先期需要用标准品加入空白血浆中,建立分析方法,具体方法可参考SFDA《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》
3楼2012-05-10 15:23:59
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)

老痞

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
3楼正解,附件详见:
http://g.zhubajie.com/urllink.php?id=12335274j654d3fjlkzii8sr
蛋白沉淀或萃取后,再用微孔滤膜过滤一下。
守候在风中的宁静。
6楼2012-05-11 14:24:37
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-05-22 15:35:44:
你好!请问一下如果我的药物是蛋白,血浆该怎么处理,进HPLC呢?

是蛋白还是多肽,多肽我之前做过,蛋白没有接触过,如果你这个药物不是全新的,可以参考一下文献,搜一下:你的药物的英文加上HPLC或plasma,看看之前有没有人建过分析方法。
8楼2012-05-22 17:17:33
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 阿娇阿娇 at 2012-05-22 18:14:28:
是蛋白质,59KD,文献没有的,是自己构建质粒表达的蛋白

如果是蛋白的话,是不是可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测?
如果直接用HPLC检测,看文献一般是先用胰蛋白酶消化后定量消化得到的肽。
比如这两篇文献:http://www.tno.nl/downloads/Anal ... 0using%20LC-MS1.pdf
http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/rcm.4856/pdf
10楼2012-05-22 19:14:37
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谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

若要测血细胞的浓度,低速离心得到血细胞,再让血细胞溶血,去蛋白,检测血细胞中的血药浓度!
13楼2012-05-29 08:07:18
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普通回帖

谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这个问题上,你要看你要测的是血浆里边的血药浓度,还是血细胞的浓度!
2楼2012-05-10 15:21:50
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小胡0905

银虫 (小有名气)

楼上思路很正确!
另外,如果是测血浆中的药物浓度,一般是要经过样品的前处理的,一般要离心
真理越辩越明
4楼2012-05-10 15:24:34
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谷牛牛

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 小胡0905 at 2012-05-10 15:24:34:
楼上思路很正确!
另外,如果是测血浆中的药物浓度,一般是要经过样品的前处理的,一般要离心

若是测血浆浓度,眼眶取血后,加抗凝剂,但是一般上正式试验之前,先得看,做个与实验,用甲醇或者已经沉淀去蛋白后,处理液中的目标化合物的浓度,根据这个来定线性范围,若处理液中浓度不够,再用液液萃取的办法浓缩进样,一般用有机试剂沉淀蛋白,操作简单,较干净的是液液萃取!
5楼2012-05-10 15:38:23
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-05-10 15:23:59:
取血后,需要加抗凝剂抗凝,然后离心得血浆
血浆需经沉淀蛋白或者萃取后,才可以进HPLC
先期需要用标准品加入空白血浆中,建立分析方法,具体方法可参考SFDA《化学药物非临床药代动力学研究技术指导原则》

你好!请问一下如果我的药物是蛋白,血浆该怎么处理,进HPLC呢?
7楼2012-05-22 15:35:44
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by liuzhaomin at 2012-05-22 17:17:33:
是蛋白还是多肽,多肽我之前做过,蛋白没有接触过,如果你这个药物不是全新的,可以参考一下文献,搜一下:你的药物的英文加上HPLC或plasma,看看之前有没有人建过分析方法。

是蛋白质,59KD,文献没有的,是自己构建质粒表达的蛋白
9楼2012-05-22 18:14:28
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