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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 药代动力学血样处理问题
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xiaoqiu2010

金虫 (小有名气)

[求助] 药代动力学血样处理问题

我刚刚接触药代动力学，对血样的处理有很多问题，忘高手指点：
1、我的药品在水中不溶，加吐温80和甘油后可澄清，是否可以静脉注射？还有对于吐温与甘油的量有没有要求？
2、血样处理我选择的乙酸乙酯+甲醇萃取，我的操作步骤是请萃取，离心，取上清，吹干，复溶，HPLC分析
问题是：A：一般萃取几次，萃取一次可以吗？
B：萃取之后取上清是定量取，还是全部取出？如果全部取出，每个样品不能保证萃取率相同怎么办？
C:吹干复溶的体积一般多大，我计划取100uL血浆，300uL萃取剂萃取。我的问题是转移到容量瓶定容是否可行？因为有人建议我转移到容量瓶，但是我觉得，转移过程可能会有损失，并且容量瓶定容是否会稀释倍数太高，检测不到？
3、看文献有用沉淀蛋白的方法，离心直接进样，这样对柱子的损伤有多大？柱子一般使用寿命会多长？
希望有人能给与知道，谢谢！
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边走边学，边学边用，边用边问
1楼2011-12-19 14:33:11
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tsunamimiao

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-12-19 15:05:06
吐温80不清楚，应该油含量限定的，甘油是等渗剂，含量2.25%，液液萃取一般是一次，萃取不一定要全部萃完，最后按比例换算回来，不需要用容量瓶
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2楼2011-12-19 14:43:07
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wangtingbin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-12-19 15:05:11
同楼上 萃取一般一次就可以了 取上清不必要都取上来 如果有内标 只要保证每次取的量一致就可以了 如果都取上来 容易取到下层 进柱子麻烦就大啦 你的c问题 我没太看懂啊 哪一步要定容？复溶后直接进样不就可以了？
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不卑不亢 厚积薄发
3楼2011-12-19 15:04:24
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shijinzzu

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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xiaoxiao270(金币+1): 谢谢 2011-12-19 22:56:45
楼上两位说的很好，萃取一次足矣，直接注射吐温80是不可以的，不知道楼主的药物溶于乙醇不溶，我知道一种药物就是溶于吐温80后再用13%的乙醇稀释至浓度静脉注射的，另外，吹干复溶的体积是要根据进液相后的情况而定的，你要先做回收率实验，确定检测限之后再决定
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大道至简，知易行难
4楼2011-12-19 21:18:52
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longshanzhao

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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jiangchunyong(金币+1): 谢谢 2011-12-20 09:02:32
1. 也可以用DMSO;
2. 一般萃取一次，如果不纯的话，可以考虑萃取两次；
  看你样品浓度是否大，如果浓度大，定量取，如果浓度小，在尽可能全部吸取上清液的情况下定量取；
  复溶的体积一般100ul就够了，复溶后要离心哦；
  直接沉淀蛋白也行，但是要接保护柱，我进了一千多个样品也没事。
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天道酬勤
5楼2011-12-20 08:58:43
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xiaofeiwa

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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xiaoqiu2010(金币+5): ★★★很有帮助 十分感谢 2012-01-09 20:53:39
1、我的药品在水中不溶，加吐温80和甘油后可澄清，是否可以静脉注射？还有对于吐温与甘油的量有没有要求？

建议多尝试几个常用溶剂，乙醇，异丙醇，乙醇注射液中浓度不要超过5%，不过这是基于动物福利来讲得。适当可以放宽到10%，再高就影响动物代谢了。

也可以尝试DMSO，注射液中浓度不超过5%。目前欧盟已经禁止在动物实验中使用了，不过国内还没有规定。

2、血样处理我选择的乙酸乙酯+甲醇萃取，我的操作步骤是请萃取，离心，取上清，吹干，复溶，HPLC分析
问题是：A：一般萃取几次，萃取一次可以吗？
萃取的次数主要看你的方法回收率，一般在80%以上就没有关系。反正你标准曲线同样方法操作，不影响结果。但是萃取前要加入内标。

B：萃取之后取上清是定量取，还是全部取出？如果全部取出，每个样品不能保证萃取率相同怎么办？

使用内标法就随便取，不会有问题。不过如果不定量取，最后内标会比较难看，建议还是定量取。但是这样在回收率上会有损失。
在样品较稀有的情况下，才使用全部取出的方法。

C:吹干复溶的体积一般多大，我计划取100uL血浆，300uL萃取剂萃取。我的问题是转移到容量瓶定容是否可行？因为有人建议我转移到容量瓶，但是我觉得，转移过程可能会有损失，并且容量瓶定容是否会稀释倍数太高，检测不到？

300ul这么小的容量瓶？
PK实验一般都是在1.5ml的离心管里配样的。使用普通的移液器来做定量。不明白容量瓶的用意。

3、看文献有用沉淀蛋白的方法，离心直接进样，这样对柱子的损伤有多大？柱子一般使用寿命会多长？

直接沉淀完全没有问题。CRO公司都是首推直接沉淀，多么经济实惠的方法。UPLC的柱子，那要做好保护，如果是普通的柱子，随便折腾吧，耐用着呢，就是大量进样后记得冲洗保养就好了。
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6楼2011-12-26 15:27:55
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xiaofeiwa

新虫 (小有名气)
内容已删除
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7楼2011-12-26 15:31:02
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小木虫

禁虫 (小有名气)
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8楼2012-05-10 20:08:20
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371147760

木虫 (著名写手)
看你萃取的回收率了，一次低的话就要两次了，通常萃取完是要全部吸出的，不是定量吸出。
有的直接沉淀蛋白后，过滤上样，如果检测良好的话也是可以的
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9楼2012-05-15 20:56:38
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