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燕尾蝶3180

木虫 (小有名气)

[求助] 关于药动学的几个问题

第一次做药动实验,很多地方不太懂,想请教一下大家:
1.我用的是大鼠取血,每次取完离心发现在上层血浆有的时候会带些红色,感觉像有点溶血,不知道这样的可不可以用,会不会影响接下来的处理后进液相测量?血浆取完后是要接着离心吗,还是半个小时内离心就可以了?我的上层血浆是放在冰箱冷冻层保存,不知道可以保存多少天不会变质?
2.关于剂量换算的问题,我查的药物的市售规格是25mg,普通片剂一次25~50mg,一日3次;缓释制剂是口服一次200mg,一日2次,我应该按哪个剂量来换算合适呢?我也是做的缓释制剂。
如果用25mg,是不是应该这么算:25/60*6.25*大鼠体重就是大鼠的给药剂量?
问题有点多,希望会的高手们帮帮我,非常感谢!

[ Last edited by 燕尾蝶3180 on 2011-12-10 at 10:37 ]
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guoguo1988820

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


燕尾蝶3180(金币+10): 2011-12-10 14:47:14
xiaoxiao270(金币+1): 多谢 2011-12-10 17:36:15
溶血一般是不会影响测定的,造成溶血的原因可能是你取血的方式或用的抗凝剂,用肝素的话,只要把取血管润湿就好,别加太多了~要是觉得多了,稍微甩掉点~取血的话,我们一般是尾静脉取血,让血自然滴出,一般不会溶血~关于血浆的保存,由于你确定方法之后是要先做方法学看方法学是否过关的,这里面就包括稳定性啊~要是你测定的化合物在冷冻状态下稳定,就可以放一定时间,一般我们是去24h,将血浆冷冻,然后一起处理的,这样保证平行性。根据经验,取完血,立刻离心比较好~
  关于剂量问题,由于药动学实验都是单次给药的,所以最好累计一天的用量用于大鼠体内,按楼主那样的算法是没错的,大鼠和人的换算剂量为6-9,稍微多点也没事,主要看你测定的化合物测得到不?先总预实验看看,在总体定剂量,这个是要结合实际情况的~
  由于一直是做药动实验~希望有帮助~嘿嘿
3楼2011-12-10 14:41:21
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TLee

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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燕尾蝶3180(金币+3): 2011-12-10 22:14:30
xiaoxiao270(金币+2): 很热心 2011-12-11 06:07:08
1.药物代谢动力学研究,主要测血浆中的药物浓度,但是如果血浆中中含有的抗凝剂影响药物浓度的测定,就应使用血清样品了。
2.血浆的制备,需要加入适量抗凝剂,加入的量没有必要准确控制,肝素一般每毫升全血加入0.1-0.2g,(用生理盐水配制)。取血前取少量置试管中,旋转使均匀分布,并且干燥使不影响待测样品体积,加入血样后立即轻轻摇匀(置液氮中或冰浴中,以终止药物代谢,因为血液中同样含有大量的药物代谢酶,常温下药物仍在代谢中)。
3.血清的制备需全血需放置一段时间,使凝血过程充分后,再行离心。
4.血浆血清的分离最好都在采血后尽快进行,保存时如果样品不经蒸发浓缩的话,最好置硬质玻璃试管中完全密封后保存。短期保存,4℃冰箱即可,长期保存一般置-20或-80℃冰箱中。放置时间以药物自身降解情况来决定。
5.药物剂量的确定,动物单给给药药代动力学实验,一般按成人一天内常用剂量的6-8倍,具体情况可参考预实验结果。多次给药可按成人每次用量的6-8倍,日给药次数和人同。一般常用的药理研究方法学书后面都会有附录。     1.2.4参考 李好枝. 体内药物分析. 人民卫生出版社.2008
              3.及括号内是个人经验。
10楼2011-12-10 21:18:03
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shijinzzu

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


燕尾蝶3180(金币+5): 2011-12-10 14:40:57
xiaoxiao270(金币+1): 谢谢 2011-12-10 17:36:05
是大鼠眼眶取血吗,本来眼眶取血就有可能造成溶血的,其次,你加的抗凝剂是不是多了呢,我们实验肝素钠的量多了也会造成溶血,这个要尽量避免的。保存时间短的话不会有什么大的问题,但是楼主为什么不提取药物得到样品吹干后再保存呢,另外给药剂量的换算是按照这个药物的量来进行换算的,最后,大鼠的耐药程度比人要高的,最后要在人给药剂量的基础上乘上一个人和大鼠的一个换算系数
大道至简,知易行难
2楼2011-12-10 13:51:48
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燕尾蝶3180

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shijinzzu at 2011-12-10 13:51:48:
是大鼠眼眶取血吗,本来眼眶取血就有可能造成溶血的,其次,你加的抗凝剂是不是多了呢,我们实验肝素钠的量多了也会造成溶血,这个要尽量避免的。保存时间短的话不会有什么大的问题,但是楼主为什么不提取药物得到 ...

谢谢你的回答,我是眼眶取血,有的时候是比较好的,就是偶尔的会发红,怕会影响以后的测量没敢用。我现在在攒空白血浆,想多攒点一起用,不知保存上一周左右血浆还能不能用?吹干后再保存我没用这个方法,想最后一起处理的
时间仍在,是我们飞逝
4楼2011-12-10 14:46:59
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yuxuezhao

铁杆木虫 (正式写手)

中药专家

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感谢参与,应助指数 +1
燕尾蝶3180(金币+2): 2011-12-10 17:16:36
xiaoxiao270(金币+1): 多谢 2011-12-10 17:36:50
一般如果取血取得比较多的话,老鼠取完后就处死时,采用腹腔动脉取血是比较好的。取血完后,要等半小时后离心,就不会出血溶血或者有果冻现象。血清在负20度的冰箱下一般可以保存一个月左右,在负80 度的冰箱下,可以保存半年
努力奋斗
8楼2011-12-10 17:13:31
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燕尾蝶3180

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by guoguo1988820 at 2011-12-10 14:41:21:
溶血一般是不会影响测定的,造成溶血的原因可能是你取血的方式或用的抗凝剂,用肝素的话,只要把取血管润湿就好,别加太多了~要是觉得多了,稍微甩掉点~取血的话,我们一般是尾静脉取血,让血自然滴出,一般不会溶 ...

非常感谢你详细的回答,我现在在攒空白血浆,是不是存太久也不好呢?不知道你们一般做方法学需要多少血浆?
时间仍在,是我们飞逝
5楼2011-12-10 14:51:24
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guoguo1988820

银虫 (小有名气)

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xiaoxiao270(金币+1): xiexie 2011-12-10 17:36:40
大鼠的空白血浆用来做方法学的吧~不用那么麻烦啊~直接股动脉取血就是了~取血量还大~一般一直能取到8ml左右的全血
6楼2011-12-10 14:52:11
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燕尾蝶3180

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by guoguo1988820 at 2011-12-10 14:52:11:
大鼠的空白血浆用来做方法学的吧~不用那么麻烦啊~直接股动脉取血就是了~取血量还大~一般一直能取到8ml左右的全血

这样的话老鼠不会死吗?我们实验经费有限,老鼠省着用那,呵呵
时间仍在,是我们飞逝
7楼2011-12-10 14:57:59
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燕尾蝶3180

木虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by yuxuezhao at 2011-12-10 17:13:31:
一般如果取血取得比较多的话,老鼠取完后就处死时,采用腹腔动脉取血是比较好的。取血完后,要等半小时后离心,就不会出血溶血或者有果冻现象。血清在负20度的冰箱下一般可以保存一个月左右,在负80 度的冰箱下, ...

谢谢帮助,不过我要离心要的是上层血浆做药动
时间仍在,是我们飞逝
9楼2011-12-10 17:17:51
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