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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 在药动试验中，标准曲线及稳定性考察的几个问题
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wangyuanji

银虫 (小有名气)

[求助] 在药动试验中，标准曲线及稳定性考察的几个问题

1）在药动试验中，稳定性考察通常会设计室温、冷藏（4℃）、冷冻循环3次（-20℃）、冷冻保存30天等等，在这几种环境条件下，设计高中低三个浓度，每个浓度制备3~5个样品，按照确定的前处理方法处理样品，测定。
我的问题是：稳定性考察的结果，是以保存后（冷冻循环3次或者冷冻30天）测得的浓度与初始时样品（分别设计高中低、每个浓度制备3~5个样品）浓度比较，考察浓度变化，以RSD表明样品经过各种环境放置后是否产生变化，怎么比较呢？比如低浓度，3~5个样品，冷冻30天后，3~5个样品，怎么比较得出稳定性与否呢（RSD）？稳定性整个做下来，比如设计三种条件（室温、冷冻循环3次、冷冻保存30天），每个条件高中低三个浓度，每个浓度3~5个样品，那一次稳定性试验样品数就是27~45个，不知道我计算的对不对？
2）在做了几只大鼠的药动试验后，发现有的大鼠血浆中药物浓度超出了标准曲线的范围，那么，此刻是应该再建立一条标准曲线，来适应超出标曲的浓度呢，还是在原来标准曲线基础上，再加一到两个浓度点呢？
3）在药动试验中，是先进行方法学考察（标准曲线、精密度、提取回收率、稳定性、准确度、检测限、定量限），还是先在大鼠体内进行预实验？方法学考察是否有一个先后顺序呢？如何避免在实际样品（大鼠）测定时，样品浓度超出标准曲线浓度范围的情况？
问题有点多，还请各位老师多多指教！
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心态比能力重要
1楼2012-09-25 21:36:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

眸中流逝

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangyuanji: 金币+5, ★★★很有帮助, 明白了许多！十分感谢你的解答！ 2012-09-28 14:42:03
1.稳定性考擦不是冷冻前后考擦，而是室温稳定性、三次反复冻融稳定性、4摄氏度稳定性、长期冻存稳定性与你在空白血浆中所加入标准品浓度相比较，比如你加的浓度5ng，根据标曲测出来是4.8ng，现在就拿4.8跟5比较，楼主慢慢揣摩吧（每个浓度平行做5个）
2.浓度超了，原则上是要做血浆稀释，你处理过之后拿甲醇稀释，这是不正确的，如果做血浆稀释，还要加入稀释的方法学考证和carry-over考证
3.最好先做个预实验，否则标曲浓度和质控浓度不好决定
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10楼2012-09-28 10:20:56
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
再次谢谢你的回答！
我的样品是血浆，可是，每一个时间点就只有100微升血浆，已经经过前处理了，没有留样了，就是说，再稀释，只能将处理后的样品（直接进液相测定的，溶剂为甲醇）进行稀释了。直接用甲醇稀释可以吗？还是需要用空白血浆稀释一倍，再按样品前处理方法再处理一遍？
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心态比能力重要
5楼2012-09-26 12:24:00
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普通回帖

阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangyuanji: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢你的回答！ 2012-09-26 11:45:30
楼主你好，我现在也在做药代，也有很多不明白的地方，希望能跟你交流一下，关于你的问题我有一些建议和疑惑，谢谢回答
（1）稳定性考察，是不是将药物加到空白血浆中配置各种浓度来检测，而不是取血后的样品放置4度或者30天等等再检测？
（2）每次实验时候要做随行标准曲线，如果你的浓度超过了标准曲线范围，建议做稀释，你可以先用稀释液做一个倍比稀释，看看结果如果不受稀释影响，检测时候就可以将样品进行稀释。这是我看的文献上面有这样做的
（3）应该是先做方法学考察的，只有这种方法满足药代条件了，才可以做体内的血药检测，方法学应该没有先后顺序之分。
     可能我回答的不专业，希望与楼主共同学习
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2楼2012-09-26 10:23:39
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wangyuanji

银虫 (小有名气)
谢谢你的回答，下面是我的理解：
1）稳定性考察，是将药物加入空白血浆中制备成高中低浓度，按前处理方法处理，检测；
2）你所说的稀释液，是空白血浆还是最终进液相测定所有的溶剂？比如甲醇？
3）先做方法学，就很可能出现实际样品测定时，超出标准曲线的问题；另外，方法学考察，我觉得提取回收率是否应该先做？在实际操作中，是应该有一个先后顺序在里边的，比如，提取回收率（绝对回收率），检测限定量限，线性范围，准确度（相对回收率），稳定性，等。
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心态比能力重要
3楼2012-09-26 11:44:48
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我说的稀释液，如果你的样品是血浆，就用空白血浆稀释就行了。
我是用的PBS，稀释样品的，跟空白血浆稀释之后差异不大，所以就用PBS代替血浆了。不太懂液相的东西，我是用免疫方法，做的ELISA
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4楼2012-09-26 12:03:35
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zzxxdd1986

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-09-26 12:24:00
再次谢谢你的回答！
我的样品是血浆，可是，每一个时间点就只有100微升血浆，已经经过前处理了，没有留样了，就是说，再稀释，只能将处理后的样品（直接进液相测定的，溶剂为甲醇）进行稀释了。直接用甲醇稀释可以 ...

可以用甲醇做进一步稀释，总量是不变的，记好稀释倍数，折算就可以了
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6楼2012-09-26 13:09:58
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D11402fc

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wangyuanji: 金币+1, ★有帮助, 谢谢回复! 2012-10-08 19:40:16
一一对应！有些药动实验是很烦的，实验量比较大，是这样的！
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7楼2012-09-26 13:18:11
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kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wangyuanji: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2012-09-26 19:09:36
wangyuanji: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢回复！ 2012-10-08 19:41:06
方法学里，检测限，定量限和标准曲线是一起的，精密度和提取回收率在标准曲线之后做，稳定性最后做，不稳定不代表你的方法不能测，只是样品在稳定期内必须完成测试，这个顺序是为了节省空白血浆和时间，不是哪的要求，就像前面有人说的，没有先后顺序要求
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8楼2012-09-26 13:36:43
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阿娇阿娇

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by wangyuanji at 2012-09-26 12:24:00
再次谢谢你的回答！
我的样品是血浆，可是，每一个时间点就只有100微升血浆，已经经过前处理了，没有留样了，就是说，再稀释，只能将处理后的样品（直接进液相测定的，溶剂为甲醇）进行稀释了。直接用甲醇稀释可以 ...

我做了一下预实验，每个时间点的血样做了倍比稀释，看看哪个稀释度可以使结果落在标曲范围内，以后就确定这个稀释度了
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9楼2012-09-26 16:54:24
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