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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 中药学 » 【求助】关于中药血清药物化学的一些问题，急！
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guoguo1988820

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于中药血清药物化学的一些问题，急！

最近在做中药的血清药物化学研究，其中中药的主要成分是黄酮类，

[ Last edited by guoguo1988820 on 2010-9-27 at 11:53 ]
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1楼2010-09-11 19:23:29
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babituo

金虫 (初入文坛)
guoguo1988820(金币+1): 2010-09-11 22:53:40
怎样取的血（剪尾，眼眶？.......），血清怎样处理的（加醇，加碱，过C18小柱？......），取血点怎样定的（1h内几个点，8h内几个点。24h内几个点？......），是否取同一只大鼠做的空白血清？血清取出后是否马上处理？检测器是否灵敏，最低检测限能否达到ng级？实在不行就做下液质吧，几百ng，几千ng都能检出来。
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水的有风度
2楼2010-09-11 22:21:00
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guoguo1988820

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by babituo at 2010-09-11 22:21:00:
怎样取的血（剪尾，眼眶？.......），血清怎样处理的（加醇，加碱，过C18小柱？......），取血点怎样定的（1h内几个点，8h内几个点。24h内几个点？......），是否取同一只大鼠做的空白血清？血清取出后是否马上处 ...

每个时间点设置多只大鼠，利用股动脉取血的
血清的处理是先加酸，然后利用甲醇沉淀蛋白，也试过乙酸乙酯萃取，过固相萃取小柱等方法，都没检测出来
空白也是取多只大鼠混匀后做的
血清取出后是立马处理，用空气吹干后再溶解进样的
检测器目前用过高效液相及液质联用了，利用液质连用的MRM全扫描后，也几乎检测不到，不知道是不是这些原型成分不吸收入血，也不应该啊，中药一般都是口服的？
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3楼2010-09-11 23:02:07
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babituo

金虫 (初入文坛)
guoguo1988820(金币+1): 2010-09-12 11:52:20
取多少血清处理（200ul，300ul，400ul？......）吹干定容用多少甲醇（200ul，100ul，60ul？......），要不用空白血浆再做下方法学，看用这种方法处理能否检测出目标物？我们检测物质用蒸发光放大八倍检测，如用液质都检测不出来，真很让人头疼。液质能否检测出目标物标准品？
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水的有风度
4楼2010-09-12 09:52:04
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guoguo1988820

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by babituo at 2010-09-12 09:52:04:
取多少血清处理（200ul，300ul，400ul？......）吹干定容用多少甲醇（200ul，100ul，60ul？......），要不用空白血浆再做下方法学，看用这种方法处理能否检测出目标物？我们检测物质用蒸发光放大八倍检测，如用液 ...

血清取的是1ml，最后用甲醇定容到500ul，这种样品处理方法以前做静脉注射的时候就用过，方法学也验证国，基本上是没问题的，所要成分都能检测出来。现在就是很头疼了，在把生药量加大的话，动物也受不了，而且提取物的水溶性也不算是很好。
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5楼2010-09-12 11:52:07
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Elffeng

金虫 (小有名气)
guoguo1988820(金币+1): 2010-09-13 15:42:35
我们做这方面也遇见过这种情况，然后我们就考虑了他吸收入血的成分是否不是以原型的形式，比如说苷，他有可能经过苷元的形式吸收入血，然而到达靶点后再转化为药物活性成分起效，那么，在这种情况你是检测不到血清中的成分的。你是是否可以换一个角度想想呢？建议仅供参考
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Elffeng
6楼2010-09-12 12:40:50
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陈林霖

至尊木虫 (正式写手)
guoguo1988820(金币+1): 2010-09-13 15:42:40
1.黄酮等酚类成分肠和肝首过效应非常严重，测不到原型很正常
2.先测一下给药的水溶液，保证所给药含有足够待测成分
3.做一个血清回收率实验，保证所用的提取方法对黄酮有足够的提取效率
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7楼2010-09-12 14:42:49
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guoguo1988820

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Elffeng at 2010-09-12 12:40:50:
我们做这方面也遇见过这种情况，然后我们就考虑了他吸收入血的成分是否不是以原型的形式，比如说苷，他有可能经过苷元的形式吸收入血，然而到达靶点后再转化为药物活性成分起效，那么，在这种情况你是检测不到血清 ...

实验用药里的主要成分我们也查阅过相关文献，有外文文献报道过其中的有效成分口服吸收利用度很低，目前我们实验室没有条件分析血清的体内代谢物，所以要找到原型成分好进一步开始药代动力学的研究。
   如果口服剂量太大了，也不行，目前毫无头绪。
   请问下你们以前遇到过这种情况，就直接定量体内代谢物了吗？

[ Last edited by guoguo1988820 on 2010-9-27 at 11:59 ]
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8楼2010-09-13 15:48:46
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Elffeng

金虫 (小有名气)
guoguo1988820(金币+1): 2010-09-14 16:56:28
有的时候是直接做体内代谢的 ，从代谢产物来反推原型药物，也可以做药物吸收机理的研究。根据你说的有效分成的口服利用度很低的话，还有就是加入一些促吸收剂，使其有效陈分入血更多，这样你更能检测到，但是现在一般都是从代谢角度反推的。
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Elffeng
9楼2010-09-14 08:26:58
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guoguo1988820

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by Elffeng at 2010-09-14 08:26:58:
有的时候是直接做体内代谢的 ，从代谢产物来反推原型药物，也可以做药物吸收机理的研究。根据你说的有效分成的口服利用度很低的话，还有就是加入一些促吸收剂，使其有效陈分入血更多，这样你更能检测到，但是现在 ...

　　　从目前的检测结果来看，可以检测到几个较大的代谢产物峰。
　　　如果加入吸收促进剂的话，会不会对实验结果有影响呢？查阅的文献中好像没有这样做的，不过可以试试。谢谢了！
　　　你们做血清药化的时候是直接做体内代谢的？那有没有加上成分分析那一块了？
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10楼2010-09-14 17:04:28
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